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枯草芽孢杆菌的分离纯化与鉴定

枯草芽孢杆菌的分离纯化与鉴定

一、目的：

掌握芽孢杆菌属常见种的分离，鉴定方法和技术。将土壤样品中

分离的芽孢杆菌属未知种鉴定到属。

二、原理：

芽孢杆菌能产生芽孢，在沸水中加热不会失去生理活性，但是不

能产生芽孢的细菌会失去活性。，因而得到芽孢菌属，经过进一步分

离及生理生化鉴定得到枯草芽孢杆菌。

三、材料和器皿：

显微镜、培养皿（12个）、试管（12个）、三角瓶（5个）、烧

杯、移液管（）、涂布棒（6个）、载玻片、接种环、接种针、试管架、

灭菌锅、培养箱

培养基：牛肉膏蛋白胨培养基、淀粉培养基、v.p.实验培养基、肉

汤琼脂培养基

孔雀绿溶液、番红复染液、NaOH溶液、草酸铵溶液、碘液、乙

醇

四、操作步骤

菌种的分离和纯化

（1）土壤的采集：取土壤表层5~10厘米下的肥土100g左右，

把采得的土壤放入纸袋中带回实验室分离。

（2）平板的制备：融化三角瓶中的牛肉膏蛋白胨培养基，以每皿

20ml左右倒入6个平板上。

（3）稀释分离法：秤取土壤5g放入含有45ml水的三角瓶中，

摇动片刻，然后将此瓶用小火加热至悬浊液沸腾，维持15分钟，而后

静止5分钟。吸取上层液0.5ml

加入到含有4.5ml的无菌水的试管中，制成1:100浓度的悬液，

然后分别吸取

10-2和10-3土壤悬浊液个0.1ml滴加到上述牛肉膏蛋白胨培养

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基平板上，每种

稀释2皿，用涂布棒均匀涂布，并将培养基倒置于37℃恒温培养

1~2天。

（4）挑菌及纯化：从上述分离的平板上分别挑取2个单菌落中部

分菌落，然后在牛肉膏蛋白胨培养基上划线纯化，经菌落特征的观察

和镜检，确定是否是芽孢杆

菌纯种后，从中选择一株转接于牛肉膏蛋白胨培养基斜面上，置

37℃培养1~2

天备用。

菌种的鉴定

1、形态的观察（形状、颜色、质地、透明度等）

（1）单个菌种的形态

（2）菌种形态的观察

2.革兰氏染色

3.芽孢染色

4.菌体大小测验

5.枯草芽孢杆菌的生理生化鉴定

一、淀粉水解

一、原理

许多芽孢杆菌产生淀粉酶，能将淀粉培养基中的淀粉水解成无色

糊精等小分子物质或进一步水解为麦芽糖或葡萄糖，淀粉水解后，遇

碘不再变蓝色。

二、培养基及试剂

培养基：肉汤琼脂中添加0.2%的可溶性淀粉，分装于三瓶。

0.1mpa，20min灭菌

试剂：卢哥尔氏碘液

三、步骤

将培养基融化后，冷却至50‘C左右，倒成平板，凝固后取菌种，

点种于平板上，每皿点钟2点，一般于30’C培养2—4天，形成菌

落后，在平板上滴加卢哥