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实验十微生物鉴定中常用的生理生化试验

摘要

本次实验包括大分子水解试验、糖发酵试验和IMViC试验（吲哚、甲

基红试验）三类试验，根据要求本实验使用六种培养基分别对所需菌种组

合进行了大约24h的培养，之后按照实验要求进行各个试验。最后观察到

了实验现象，了解了所用菌种鉴别的方法和原则。

关键词

微生物鉴定；生理生化试验；大分子水解试验；糖发酵试验；IMViC

试验

前言

类的微生物有着不同的代谢类型，例如对一些物质的分解能力及分解

代谢的产物的不同反映出他们不同的生理特征，这些特征可以用来对不同

种类微生物进行鉴定和分类。因此可以对微生物的不同生化反应进行试验，

以此证明微生物生理特征的多样性，证明微生物分类鉴别的依据。生理生

化试验相比其他鉴别方法而言相对简便、快捷、经济实用，在一般的实验

室中都可以进行，因此在微生物种类的初步鉴别中被广泛使用。

一、实验目的

1、大分子水解试验

证明不同微生物对各种有机大分子物质的水解能力不同，从而说明不

同微生物有着不同的酶系统，掌握进行微生物大分子物质水解试验的原理

和方法。2、糖发酵试验

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了解糖发酵的原理和在肠细菌鉴定中的重要作用，掌握通过糖发酵鉴

别不同微生物的方法。3、IMViC试验

了解IMViC的原理及其在肠道细菌鉴定中的意义和方法。

二、实验原理

在所有生活细胞中存在的全部生物化学反应称之为代谢。代谢过程主

要是酶促反应过程。具有酶功能的蛋白质多数在细胞内，称为胞内酶

（endoenzyme）.许多细菌产生胞外酶(e某oenzyme)，这些酶从细胞中释

放出来，以催化细胞外的化学反应。各种微生物具有不同的酶系统，所以

它们能利用的底物不同，或虽利用相同的底物但产生的代谢产物却不同，

因此可以利用各种生理生化反应来鉴别不同的细菌，尤其是在肠杆菌科细

菌的鉴定中，生理生化试验占有重要的地位。具体的原理如下：1、大分

子水解试验：

微生物对大分子如淀粉、蛋白质和油脂不能直接利用，必须依靠产生

的胞外

酶将大分子物质分解后才能被微生物吸收利用。微生物的胞外酶（如

淀粉酶、脂肪酶等）主要为水解酶，通过加水裂解大分子物质为较小化合

物，使其能被运输至细胞内。将大分子物质分解的过程可以通过观察细菌

菌落周围的物质变化来证实。淀粉遇碘液会产生蓝色，但细菌水解淀粉的

区域，用碘液测定时，不再产生蓝色，表明细菌产生淀粉酶。脂肪水解后

产生脂肪酸可以改变培养基的PH，使PH降低，加入培养基的中性红指示

剂会使培养基从淡红色转变为深红色，说明细胞外存在脂肪酶。2、糖发

酵试验：

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糖发酵试验是常用的鉴别微生物的生化反应。在肠道细菌的鉴定上尤

其为重要，绝大多数细菌都能利用糖类作为碳源和能源，但是它们在分解

糖类物质的能力上有很大差异，有些细菌能分解某种糖产生有机酸和气体，

有些细菌只产酸不产气。例如，大肠杆菌能分解乳糖和葡萄糖产酸并产气；

普通变形杆菌分解葡萄糖产酸产气，不能分解乳糖。发酵培养基含有蛋白

胨、指示剂（溴甲酚紫）、倒置的德汉氏小管和不同的糖类。当发酵产酸

时，溴甲酚紫指示剂可由紫色（PH6.8）转变为黄色（PH5.2）。气体的产

生可由倒置的德汉氏小管中有无气泡来证明。3、IMViC试验吲哚试验：

用来检测吲哚的产生，有些细菌产生色氨酸酶，分解蛋白胨中的色氨

酸，产生吲哚和丙酮酸。吲哚与对二甲基氨基苯甲醛结合，形成红色的玫

瑰吲哚。但并非所有的微生物都具有分解色氨酸产生吲哚的能力，因此吲

哚试验