生活饮用水中总大肠菌群MPN法的不确定度评定1.docxVIP

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生活饮用水中总大肠菌群MPN法的不确定度评定

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摘要：目的探讨生活饮用水中总大肠菌群MPN法定量检测结果的不确定度及评定方法。方法依据《CNAS-CL07:2011测量不确定度评估和报告通用要求》和《GB/T5750.12-2006生活饮用水标准检测方法微生物指标》中总大肠菌群定量检测MPN法，以实例来评定MPN法测定结果的不确定度。结果合成标准不确定度为0.342。扩张不确定度为0.772；总大肠菌群含量为4.6×102～1.6×104MPN/100mL。结论重复性测量对不确定度影响最大，在检测过程中应注意控制。

关键词：MPN；总大肠菌群；合成不确定度；扩展不确定度

中图分类号：R-33文献标志码：B文章编号：

DOI编码：

测量结果不确定度的评定是实验室质量体系的重要组成部分，是实验室管理的重要内容。一个完整的测量结果，除了给出最佳的估算值外，还要对其进行不确定度的评定，实验室内部质量控制和外部质量控制、方法验证、能力测试和实验室认证认可更是要求提供包含因子或置信水准约定的测量结果的不确定度。CNAS-CL07:2011《测量不确定度评估和报告通用要求》中提到政策建议检测实验室必须建立“测量不确定度”的评定程序，实验室应有能力对每项有数值要求的测量结果进行测量不确定度评定[1]。本文依据GB/T5750.12-2006《生活饮用水标准检测方法微生物指标》中总大肠菌群多管发酵法的测定方法[2]，探讨本实验室在生活饮用水中大肠杆菌定量检测过程的不确定度评定。

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1材料与方法

1.1仪器和材料

大肠杆菌标准菌株ATCC25922；乳糖蛋白胨培养液（北京陆桥技术有限责任公司，批；营养琼脂培养基（北京陆桥技术有限责任公司，批；生理盐水；高压蒸汽灭菌锅；生物安全Ⅱ级生物安全柜；恒温培养箱：36℃±1℃；冰箱：0～4℃；-20℃低温冰箱；-80℃低温冰箱；10mL刻度移液器、微量移液器及吸管；玻璃试管；量筒；小倒管。

1.2方法

1.2.1检测依据

GB/T5750.12-2006《生活饮用水标准检测方法微生物指标》中总大肠菌群多管发酵法[2]。

1.2.2样品制备

将大肠杆菌标准菌株ATCC25922接种于营养琼脂培养基，用无菌接种环进行分区划线，促使形成单个菌落，36℃±1℃，培养18～24h。挑取单个纯菌落，制备0.5麦氏单位菌悬液，将0.2mL菌悬液至无菌玻璃瓶内，再加入0.2mL灭菌脱脂乳，稍振摇使之混匀。将上述小瓶放入500mL干燥瓶内，-80℃预冻0.5h，待小瓶中菌悬液冻成固体后取出，抽真空冷冻干燥，24-36h。在无菌室内将封口膜取下，迅速换以无菌橡皮塞，最后用封口膜封口，-20℃低温冰箱保存。同样方法制备10管冻干菌株，作为待检样品。

1.2.3检测过程

将待检样品室温平衡30min，将待检样品用10mL生理盐水稀释溶解，转移至无菌三角烧瓶中，定容至60mL。取10mL样品接种到10mL双料乳糖蛋白胨培养液中，接种5管；取1mL样品接种到10mL单料乳糖蛋白胨培养液中，接种5管；另取1mL样品加入9mL灭菌生理盐水中（即1:10样品），混匀后吸取1mL接种到单料乳糖蛋白胨培养液中，接种5管；取1mL1:10样品加入9mL灭菌生理盐水中（即1:00样品），混匀后吸取1mL接种到单料乳糖蛋白胨培养液中，接种5管。将接种管置于恒温培养箱内，36℃±1℃，18～24h。

1.2.4结果判断

乳糖蛋白胨培养液产酸产气为阳性，不产酸产气则为阴性。确定阳性反应管数，查对MPN检索表，根据稀释倍数进行换算，确定每100mL样品中大肠菌群的含量值[2-3]。

2结果

2.1检测结果不确定度分析

2.1.1建立数学模型

根据GB/T5750.12-2006方法[2]中总大肠菌群定量测定——多管发酵法MPN检索表，其检测结果的数字模型为：

其中：Y为待测样品中大肠菌群含量，其单位为CFU/mL。C1为GB/T5750.12-2006方法总大肠菌群多管发酵法中MPN检索表的样品加入量（55.5mL）;C2为检测时实际的样品加入量，通常为55.5mL或5.55mL、0.555mL。

2.1.2不确定度来源及分析

测量不确定度一般由若干分量组成。其中一些分量可根据一系列测量值的统计分布，按测量不确定度的A类评定进行评定。而另一些分量则可根据基于经验或资料及假设的概率分布估计的标准偏差表征，按测量不确定度的B类评定进行评定

[4]。本次实验菌落总数定量检测测量不确定度的来源涉及以下步骤：样品→溶解→定容至60mL→吸取→稀释→接种→结果判读→不确