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以下是简单整理的东西

产前实验流程解析

.血浆分离.DNA提取.文库构建

主要内容:

血浆分离

实验流程:

1.预冷离心机。

2.将全血按同的医院代码分类，记录各医院全血的流水号，然后置于

4℃冰箱暂存。

3.待离心机预冷至4℃，将全血样品置于离心机中（离心时注意严格

配平），1600g离心10min。此过程可准备实验需要的中转管和最终管。

4.离心完成后吸取上清液平均分到2个或多个已编号的2.0mlEP管中，

注意核对样本编号及能吸到白细胞和红细胞，此过程需要在冰盒上操

作，并严格对号。

5.将上一步得到的血浆置于预先冷却至4℃的离心机，16000g离心

10min，离心后将上清转入新的已编号及贴好血浆条码2.0mLEP管中，

至少保证前3管体积为600ul，此过程同样需要在冰盒上操作，并严

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格对号。

6.分离完成后制作产前血浆分离反馈表.

注意事项

1.全血样本必需在离体8小时内分离完血浆。

2.必需保证样本在低温条件下离心，离心时应严格配平。

3.开启EP管盖时，注意能碰到EP管内盖。

4.血浆分离结束后，若短期内无法将样本送往配送组入库，必需将样

本置于-20℃冰箱中暂存。

5.离心机使用结束后应及时关掉电源。

6.吸取上清时慢吸慢打，吸到中间层的白细胞，若吸到白细胞应将全

血重新离心。

7.去DNA清洗液为酸性溶液，能用于清洗离心机转子，以免腐蚀转子。

8.实验所用EP管架需定期用1%盐酸浸泡过夜后洗净再使用。

9.若实验室未配制DNA清洗液，可用10%次氯酸钠代替，使用方法

同DNA清洗液。

问题

问：第一步离心后，从采血管内吸取血浆时，吸到白细胞和红

细胞，怎么处理？

答：重新离心5-10min

问:为什么要严格要求第一步分离血浆时能吸到中间层的白细胞和红

细胞？

答：由于第二步高速离心会使得有核细胞破裂，造成人体基因组DNA

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的释放，母体DNA背景过大，从而影响实验结果。

问：为什么无创产前基因检测样品类型是血浆而选用血清？

答：血清是添加抗凝剂而通过自体纤维蛋白原和凝血因子分离出来的

上清液，血浆则是添加抗凝剂后析出的上清液。血清在血凝块收缩时

会导致细胞内DNA的释放，导致母体背景DNA过大，影响实验结果，

而血浆内基质更稳定，可保存时间更长。

DNA提取

原理：

在高盐低pH的条件下通过硅胶膜特异吸附，将裂解液中的DNA吸附

到硅胶膜上，去除杂质后用低盐洗脱液洗脱得到吸附在膜上的DNA。

天根试剂盒DNA提取简易流程

600μL血浆+10μL蛋白酶K

加入600μLGBmix（GB：carrierRNA=1mL：10μL），混匀

56℃水浴10min，取出后冷却5min，短暂离心

加入300μL冷冻无水乙醇，轻轻颠倒混匀

将混合液转入提取柱中，8000rpm离心30s

弃滤液，加入500μLGD，8000rpm离心30s

弃滤液，加入500μLPW，8000rpm离心30s（重复1次）

弃滤液，12000rpm离心2min

将提取柱放在1.5mL离心管上晾干3min