石榴籽中总多酚提取工艺的考察及体外清除DPPH自由基的研究1.docxVIP

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石榴籽中总多酚提取工艺的考察及体外清除DPPH自由基的研究

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项目名称：黔东南州科技计划课题《新型污染性有机分子检测材料的研究》（黔东南科合J字（2016）008号）

摘要：通过正交试验对石榴籽中总多酚提取工艺以及其体外抗氧化活性进行了研究。实验结果表明：时间和乙醇浓度对总多酚含量影响较大，确定石榴籽多酚类物质提取的最佳工艺条件为：乙醇浓度40%，提取时间6min，提取温度60℃，在此条件下石榴籽总多酚含量为0.191mg/g，同时以DPPH自由基清除率为指标，对石榴籽提取的多酚类物质进行了体外抗氧化活性的研究，当石榴籽总多酚浓度在0.210mg/mL时，清除率为55.44%。说明石榴籽的总多酚提取物具有一定的体外抗氧化活性。

关键词：石榴籽；总多酚；提取工艺；抗氧化；DPPH自由基。

石榴（Punicagranatum）是石榴科、石榴属的落叶灌木或小乔木[1]。石榴的果实中可食的籽粒部分约占果实总重的40%，而籽粒中22%为种子[2]，籽粒具有很高的营养价值，并且石榴籽提取物中富含多种抗氧化物质，如多酚类化合物。多酚是石榴中最常见的一种化学成分，虽然在石榴籽中含量小，但其提取物常用作强抗氧化剂使用[3]。而且石榴籽中的多酚类物质，对人体有很大的作用，具体主要有抗氧化、清除自由基、抗癌和抗肿瘤、以及防止心脑血管疾病等作用[4]。目前，植物多酚的提取方法主要包括超声波辅助提取[5]、超声协同酶法提取[6]、回流法提取[7]、酶法辅助提取[8]等，这些方法均能有效提取植物中的总多酚，然而，由于超声波产生的机械振动能够有效破坏细胞结构，从而加速了多酚的溶出，有效缩短了提取时间，同时避免了高温对多酚成分的破坏[9]，因此，超声波辅助法已广泛应用于植物多酚的提取。

目前，石榴主要被加工成石榴汁或石榴酒，石榴籽作为副产品没有得到充分合理的综合利用，造成巨大的浪费，开发与利用石榴籽资源变得越来越迫切[4]。

石榴的深加工产品多在功能性食品方面，如石榴果汁、石榴果醋等，而对于石榴籽的研究较少[12]。研究发现，石榴籽多酚类物质含量和种类都较为丰富[13]，且具有极强的抗氧化能力，是天然的抗氧化剂，但通常都被做为废弃物处理，因此利用石榴籽，不仅能为石榴的综合利用开辟新途径，而且还可带来巨大的经济效益和社会效益[14]。本研究以溶剂-超声波辅助法对石榴籽总多酚含量的提取工艺进行考察，并考察石榴籽总多酚清除DPPH自由基的能力，为其抗氧化活性功效提供理论依据。

1仪器与试剂

1.1材料与主要试剂

新鲜石榴（产于云南）碳酸钠、福林酚试剂、没食子酸、无水乙醇、DPPH自由基、维生素C，以上均为分析纯。

1.2仪器

鼓风干燥箱、粉碎机，电子分析天平，超声清洗机，离心机，TU-1900紫外可见分光光度计、恒温水浴锅、磁力搅拌器。

2实验部分

2.1石榴籽的预处理

将新鲜石榴进行人工处理，将石榴肉弄碎，留下石榴籽，并将石榴籽洗干净后放在恒温鼓风干燥箱中烘干，温度为40摄氏度。待石榴籽干燥后用粉碎机粉碎，过40目筛，将得到的石榴籽粉末密封置于干燥缸中储存，备用。

2.2没食子酸标准曲线的绘制

精密称取没食子酸标准品0.0008g，用蒸馏水溶解并定容至100mL，得浓度为0.008mg/mL的标准液。分别准确吸取0、1、2、3、4、5mL的标准液置于50mL容量瓶中，浓度分别为0.008mg/L、0.016mg/L、0.024mg/L、0.032mg/L、0.04mg/L，加蒸馏水至20mL，然后分别加入Folin-ciocalteu试剂1mL，混匀，在0.5~8min内加入3mL10%的Na2CO3溶液，充分混合后定容，30℃避光放置30min，以空白调零，在760nm下测吸光值，每个样品平行测定2次。以没食子酸在反应体系的浓度C为横坐标，吸光度值A为纵坐标，绘制标准曲线。

2.3石榴籽总多酚提取工艺的单因素考察

总多酚含量的测定采用福林酚比色法(Folin-Ciocalieu)[15]。准确量取制备好的石榴籽多酚提取液1mL于50mL容量瓶中，加入20mL蒸馏水，摇匀，再加入1mlFolin-ciocalteu试剂1mL，混匀，在0.5~8min内加入3mL10%的Na2CO3溶液，充分混合后定容，30℃避光放置30min，以没食子酸标准液为空白对照，在760nm下测定吸光值，每个样品平行测定2次，取平均值。

2.3.1乙醇浓度对多酚含量的影响

准确称取制备好的石榴籽粉末1g置于提取管中，平行称取5份，加入乙醇浓度分为30%、40%、50%、60%、70%的乙醇浓度于提取管中，以1