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病毒感染实验诊断

1.（1）一般原则是特异敏感、快速和简便。首先根据流行病学和临床特点，初步判断可能

感染的病毒。

（2）然后根据可疑病毒的生物学特点、机体免疫应答和临床过程，以及病人当前所处的

时机，确定实验诊断方法。

2.

（1）对潜伏期短，发病时尚无抗体产生，可选择测定病毒颗粒、病毒抗原或核酸。

（2）对潜伏期超过十天的感染，可检测特异性的IgM抗体来进行早期快速诊断，及区别初

次和再次感染。

（3）对可在体内形成持续感染或潜伏感染的病毒，可检测急性期和恢复期双份血清的IgG

抗体有无4倍以上升高，或直接检测病毒核酸。

（4）对原因不明或有新病毒感染时，应采集标本进行病毒分离，同时应采取双份血清以确

认分离的病毒为病原体。

（5）对同一症状可有多种病毒引起的情况，应同时检测几种相关病毒的病毒颗粒、抗原或

抗体。

（6）对由多个型别组成的病毒可测定它们的共同抗原。

第一节标本采集与运送

一、标本的采集

1.采样时间：尽可能在发病的初期，急性期或患者人院的当天进行。

2.标本种类的选择：根据临床感染的症状及流行病学资料，判断可能感染病毒种类，选择

相应部位采取标本。

常见分离病毒标本的选择：

3．常见标本的采集方法

(1)血液：以无菌取抗凝血10ml。抗凝选用100n／ml肝素钠。用于分离CMV、HSV，、黄

病毒、EBV、HIV-1及新生儿肠道病毒。

(2)脑脊液：以无菌取脑脊液1～2ml，冰浴立即送检。在4℃可存放72h。用于分离柯萨奇

病毒、ECHO病毒、肠道病毒、腮腺炎病毒。

(3)宫颈或阴道拭子：采取病灶部位分泌物，或将拭子伸人宫颈约lcm停留5秒取出，冰浴

立即送检。用于分离HSV、CMV。

(4)粪便标本：取2～4ｇ粪便加10ml运送液立即送检，用于分离腺病毒、肠道病毒和轮状

病毒。

(5)含漱液：用无菌生理盐水让患者含漱。用于分离流感病毒、副流感病毒、鼻病毒、RSV

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等。

(6)喉拭子：用压舌板避免唾液污染，用拭子采取咽喉部表面。用于分离腺病毒、CMV、肠

道病毒、HSV、流感病毒等。

(7)尿道拭子及尿液标本：尿道拭子伸人尿道4cm转动3次，以获得较多的上皮细胞，用于

分离CMV和HSV。

(8)尸检标本：死亡后尽早采集各种器官，分别使用器械和容器。

二、标本的运送和保存

1.病毒抵抗力弱，室温中容易灭活，用于分离培养的标本要尽快送检，4℃下数ｈ或-70℃。

冻存液中加入甘油或二甲基亚砜(DMSO)等作保护。

2.病毒传送培养基以Hanks液为基础加灭活的小牛血清。为抑制细菌生长加青霉素100U／

ml和链霉素100μg／ml，为了抑制真菌的生长加入2．5μg／ml二性霉素B或40μg／ml

制霉菌素。

第二节病毒分离与鉴定

一、病毒的分离方法

1.组织细胞培养根据细胞的来源、特性和传代次数分为：

(1)原代细胞培养：将细胞悬液。加入营养液培养。形成的单层细胞，称之为原代细胞。

(2)二倍体细胞株：仍保持二倍体特性。寿命一般为40～50代，如人胚肺细胞。广泛用于

病毒分离和疫苗制备。

(3)传代细胞系：来于肿瘤细胞，染色体特征类似肿瘤细胞。常用的有人宫颈癌细胞(Hela)、

人喉上皮癌细胞(Hep-2)。

2．鸡胚接种鸡胚是用于分离粘