氢氧化钙对人根尖牙乳头干细胞增殖影响研究.docx

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氢氧化钙对人根尖牙乳头干细胞增殖影响研究

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摘要：目的：探究氢氧化钙对人根尖牙乳头干细胞增殖影响。方法：通过酶消化法联合组织块贴壁法分离人根尖牙乳头组织进行培养，鉴定其干细胞特性，并在不同浓度氢氧化钙影响下分析其增殖情况。结果：在第5d开始时，氢氧化钙组浓度低于5%B组对细胞增殖的抑制作用与对照组相比无统计学差异，（p＞0.05）；但氢氧化钙组浓度高于5%B组对细胞增殖的抑制作用有统计学意义，（p＜0.05），而在第7d与第9d开始开始时氢氧化钙组与对照组对于细胞增殖均表现出抑制效果，并有统计学差异（p＜0.05）。结论：高浓度的氢氧化钙抑制了SCAP的体外增殖，但由于本次研究样本较少，药物是否会导致生物相容性及安全性问题的出现仍需进一步研究。

关键词：氢氧化钙；人根尖牙乳头干细胞；增殖影响

年轻恒牙在青少年的发育过程中起着重要作用，是保障正常牙列与咬合关系的重要部位，也影响着人的面貌美观。近年来随着青少年龋齿病发病率的逐渐增高，临床对年轻恒牙的治疗成为研究的重点[1]。为探究氢氧化钙对人根尖牙乳头干细胞增殖影响，本次试验通过酶消化法联合组织块贴壁法分离人根尖牙乳头组织进行培养，鉴定其干细胞特性，并在不同浓度氢氧化钙影响下分析其增殖情况，详见下文描述。

1材料与方法

1.1材料

氢氧化钙（河北佰品生物科技有限公司）；ACB型免疫组化检测试剂盒（博士德公司）；鼠抗人角蛋白多克隆抗体（博士德公司）；鼠抗人STRO-1单克隆抗体（R/D公司）；CD24单克隆抗体（R/D公司）；MTT（Sigma公司）。

1.2方法

1.2.1细胞的分离与培养

收集健康第三磨牙，收集对象为由于正畸需要至我院行拔牙的患者，第三磨牙未发育完全，拔出后将其送入PBS液中彻底清洗，将根尖牙乳头分离并剪碎，再将其加入含有I型胶原（3mg/ml）与Dispase酶（4mg/ml）混合液中轻轻震荡，置于保温箱中，设置环境温度为37℃令其消化1h，再接种至六孔培养板中，孵箱中设定环境温度为37℃，二氧化碳浓度5%，培养基15%FBSα-MEM，开始培养，换液频率1次/2-3d，当细胞生长会和后对其进行收集并完成传代培养[2]。

1.2.2不同浓度氢氧化钙对人根尖牙乳头干细胞增殖影响

收集细胞24h后将其随机分为对照组与氢氧化钙组两组，氢氧化钙组由0.1%、0.5%、1.0%、5%、10%、15%不同浓度组成，分别将其加入α-MEM培养基，对照组为α-MEM完全培养基，培养时间1、3、5、7、9d后停止培养，并对SCAP待测孔进行检测，重复3次，对所得统计学数据进行分析。

1.3统计学分析

试验涉及数据进行统一处理，处理软件为SPSS21.00统计学信息软件，输入数据后，计数资料与检验方式分别为“x2”、“%”；计量资料与检验方式分别为“（）”、“t”，p值表示组间数据的差异性，p＜0.05时组间差异具有统计学意义。

2结果

2.1不同浓度氢氧化钙影响下SCAP增殖能力的变化情况

在第1d与第3d开始时，各组OD值相比无统计学差异，（p＞0.05）；在第5d开始时，氢氧化钙组浓度低于5%B组对细胞增殖的抑制作用与对照组相比无统计学差异，（p＞0.05）；但氢氧化钙组浓度高于5%B组对细胞增殖的抑制作用有统计学意义，（p＜0.05），而在第7d与第9d开始开始时氢氧化钙组与对照组对于细胞增殖均表现出抑制效果，并有统计学差异（p＜0.05）。见下表1：

表1不同浓度氢氧化钙影响下SCAP增殖能力的变化情况

时间（d）

对照组（A）

氢氧化钙组（B）

0.1%（B1）

0.5%（B2）

1.0%（B3）

1

0.188±0.020

0.179±0.026

0.0175±0.0211

0.163±0.033

3

0.232±0.026

0.204±0.038

0.0213±0.042

0.219±0.031

5

0.276±0.060

0.251±0.079

0.228±0.071

0.213±0.021

7

0.896±0.072

0.514±0.066

0.508±0.068

0.443±0.098

9

0.921±0.050

0.495±0.075

0.511±0.076

0.443±0.083

时间（d）

对照组（A）

氢氧化钙组（B）

5%（B4）

10%（B5）

15%（B6）

1

0.188±0.020

0.188±0.023

0.178±0.023

0.160±0.014

3

0.232±0.026

0.236±0.049

0.211±0.097

0.217±0.114

5

0.276±0.060

0.249±0.081

0.180±0.041

0.154±0.038