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高效液相色谱分析HBIW产品纯度

一、实验目的

1.理解高效液相色谱原理；

2.了解高效液相色谱站工作原理；

3.掌握HBIW的纯度分析方法。

二、实验原理

高效液相色谱（highperformanceliquidchromatography，HPLC）是20世纪60年代

末，在经典也想色谱和气象色谱的基础上发展起来的一种具有高灵敏度、高选择性的高效快

速分离分析技术。与经典液相色谱相比较，HPLC采用微球填料（5-10μm），使用了高压输

液泵，所以传质快、柱效高（可达20000-80000塔板/米），能分离多组分复杂混合物或性质

及相近的同分异构体，并可实现快速分离。高效液相色谱还可以称为高压液相色谱（high

pressureliquidchromatography），高速液相色谱（highspeedliquidchromatography）、

高分力度液相色谱（highresolutionliquidchromatography）或现代液相色谱（modern

liquidchromatography）。

HPLC法原理：一固液色谱法为例。固定相是固相吸附剂，它们是一些多孔性的极性微

粒物，如硅胶、氧化铝等。它们的表面存在着分散的吸附中心，溶质分子流动相分子在吸附

剂表面呈现的吸附活性中心上进行竞争吸附，这种作用还存在于不同荣哲分子间，以及同一

溶质分子中不同官能团之间。由于这些竞争作用，便形成不同溶质在吸附剂表面的吸附、解

吸平衡，这就是液相色谱具有选择性分离能力的基础。本实验所采用的HPLC就是液相色谱。

HPLC色谱仪简介：高效液相色谱仪分为分析型和制备型，虽然它们的性能各异，应用

范围不同，但其基本组件类似。主要部件如下：储液罐、高压输液泵、进样装置、色谱柱、

检测器数据处理装置等。

HPLC法的特点：高效液相色谱采用液体流动相，流动相也影响分离过程，这对分离的

控制和改善提供了额外的因素，它能分析气象色谱不能分析的高沸点有机物、高分子和热稳

定性差的化合物以及具有生物活性的物质。在全部有机化合物中，仅有20%的样品可用气相

色谱分析，其它80%的样品可用高效液相色谱分析。HPLC易于对样品定量回收，这对任何规

模的植被突然别有利。在很多情况下，HPLC不仅是作为分析方法，更多的是作为一种分离

手段，用以提纯和制备具有足够纯度的单一物质。

HPLC谱有多种定量分析方法，如：峰面积（高峰）百分比法；校正归一化法；外标法

和内标法。

HBIW纯度分子方法：本实验采用反相液相色谱法，它是以极性物质做流动相，非极性

物质作固定相的一种色谱方法。反相液相色谱分析中常用的流动相有甲醇、乙腈、四氢呋喃

和水。本实验采用四氢呋喃/水为流动相。

三、实验步骤

实验材料：纯净水（用前须过滤）；甲醇（分析纯，用前须过滤）；四氢呋喃（分析

纯，用前须过滤）；HBIW（自制）。

仪器设备：高效液相色谱；色谱柱：填料SinoChromODS-BP，不锈钢柱φ4.6mmＸ

+

200mm,粒径5μm；检测器：UV230紫外-可见检测器，波长连续可调；P230型高压恒流泵：

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流量范围0.001mL/min-9.999mL/min，设定步长0.001mL/min，最高工作压力40MPa（0.001

mL/min-5.000mL/min）、20MPa（