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反相高效液相色谱法（HPLC）分析小鼠血清和组织中的视黄醇以及视黄基酯

1.材料

1.1。标准品的准备

1.乙醇（ACS级）。

2.视黄醇（Sigma）。

3.视黄酯（Sigma）。

4.维生素A棕榈酸酯（Sigma）。

5.带帽棕色试剂瓶

1.2。视黄醇的提取

1.新鲜或冷冻的血清或组织（全部样品解剖后立即在液氮中快速冷冻，并储存在-80℃。如

果可能的话，从血清和组织萃取视黄醇必须“在黑暗中”迅速地进行，所有的提取步骤应在冰

上或在冷室中进行。实验室窗户应覆盖合适的材料，如铝箔或厚重的窗帘（没有窗户的房间，

是执行此过程的理想场所）。人工照明应在零售商店买黄色灯泡。另外，使用昏暗的灯光

下，不要把样品直接暴露在灯光下，尽量减少光敏感视黄醇损失）。

2.使用内标法所需要的内标物（视黄醇乙酸酯）。

3.乙醇（ACS级）。

4.己烷（HPLC级）。

5.H2O（HPLC级）。

6.PVDF过滤膜即聚偏二氟乙烯膜（0.22微米，47毫米）。

7.全玻璃过滤装置。

8.磷酸盐缓冲盐水（PBS），仅用于组织。

9.N2气体，Evap-O-Rac系统（科尔-帕默）。

10.PRO200手持式均质匀浆器，仅用于组织。

11.巴斯德玻璃移液管（9英寸）和洗耳球。

12.聚丙烯管（12毫米×75毫米）。

13.玻璃试管（13毫米×100毫米16毫米×100毫米）。

1.3。视黄醇的分析

1.高效液相色谱法系统（本章中所提到的HPLC配件如棕色小瓶，进样瓶，瓶帽与戴安终极

版3000系列高效液相色谱仪兼容。不同的HPLC系统可能还需要其他一些类型的配件）

2．色谱柱（在我们的实验中，随着时间的推移，这个贝克曼色谱柱显示的结果具有重复性

（包括保留期））

3.保护柱

4.棕色试剂瓶（本章中所提到的HPLC配件如棕色小瓶，进样瓶，瓶帽与戴安终极版3000

系列高效液相色谱仪兼容。不同的HPLC系统可能还需要其他一些类型的配件）

5.自动进样瓶（这个玻璃插入物通过一个弹簧塞进瓶里，弹簧对接触尖状物起缓冲作用。一

旦完成样品的分析后，我们应该好好保存弹簧便于以后组装新的小瓶。）

6.带有瓶盖的PTFE/硅隔膜（这些瓶盖和隔垫，可单独购买，(capw/osepta,National

Scientific,cat.no.C4000-98BLK;septa,NationalScientific,cat.no.C4000-60).）

7.甲醇（HPLC级）。

8.乙腈（HPLC级）。

9.二氯甲烷（HPLC级）。

2方法

由于视黄醇的光敏性质，所有以下实验程序应该在黑暗中“”执行。（从血清和组织萃取视

黄醇必须“在黑暗中”迅速地进行，所有的提取步骤应在冰上或在冷室中进行。实验室窗户应

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覆盖合适的材料，如铝箔或厚重的窗帘（没有窗户的房间，是执行此过程的理想场所）。

人工照明应在零售商店买黄色灯泡。另外，使用昏暗的灯光下，不要把样品直接暴露在灯光

下）

2.1标准品的准备

1.制备标准品储备溶液是将标准品溶解到适当的溶剂中，如下：乙醇溶解视黄醇及视黄醇

酯;正己烷溶解维生素A棕榈酸酯。

2.标准品储备液应该在棕色试剂瓶内制备并保存在-20°C。（高度浓缩的类视黄醇标准储