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【摘要】目的探索间充质干细胞(mscs)在

人胎盘组织中的分布规律。方法取正常剖宫产之足月

健康产妇的新鲜胎盘组织,按中央带、中间带、边缘带、

绒毛板层、中间层和基底板层分为9组:aa、ab、ac、

ba、bb、bc、ca、cb、cc。连续切片,以抗cd166、抗

cd44、抗cd29分别做免疫荧光和免疫组化染色。显微

镜下观察阳性细胞分布区域,采用彩色病

理图像分析系统进行图像分析。结果cd166、cd44、

cd29阳性表达细胞的分布情况较一致,主要集中于血

管内皮下及血管附近间质内。胎盘中央带中间层(ab)

阳性细胞较集中,阳性表达的强度较强,其od值与其它

组差异有统计学意义(p伦理委员会批准,获取临床正

常剖宫产之足月健康产妇的新鲜胎盘组织,所选择的

胎盘脐带附着点均在胎盘中央或稍偏位,大小及重量

在正常范围内。

方法

分组将胎盘组织分为中央带即脐带附着处(a)、

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边缘带即距脐带附着点最远处(c)和中间带即两者之

间中点处(b)3大组,每组从胎儿面向母体面再分为绒毛

板层(a)、中间层(b)和底板层(c)3小组。

冰冻切片取aa、ab、ac、ba、bb、bc、ca、cb、

cc9处新鲜组织,大小为1cm×1cm×,以oct包埋于冻台

上,速冻后切5μm薄片,贴附于载玻片。

石蜡切片取前述9处组织,大小为1cm×1cm×,

中性福尔马林液中固定24h,梯度酒精溶液脱水,二甲

苯透明,浸蜡,石蜡包埋后切5μm薄片,贴附于涂布多聚

赖氨酸的玻片。

染色

免疫组化染色(sabc法)切片置60℃烘箱内过夜,

取出后以二甲苯脱蜡,梯度酒精洗去二甲苯、水化,pbs

冲洗3min×3次,置枸橼酸钠溶液中微波加热以修复抗

原,自然冷却后以pbs冲洗3min×3次,滴加抗体(cd29、

cd44,阴性对照滴加pbs),室温1h,pbs冲洗3min×3次,

滴加免疫反应增效剂,dab显色3～10min,充分水洗,苏

木素复染5s,盐酸酒精分化1s,流水促蓝,梯度酒精脱水,

二甲苯透明后以中性树胶封片,置显微镜下观察。

免疫荧光染色将冰冻切片稍稍风干后即滴加ι

抗(cd166,浓度为1∶400,阴性对照滴加pbs),置37℃水

浴箱中1h,pbs冲洗3min×3次,洗去多余抗体,滴加fitc

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