注射用rhCNB成品聚山梨酯80含量测定研究.docxVIP

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注射用rhCNB成品聚山梨酯80含量测定研究

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摘要:目的：建立注射用rhCNB成品聚山梨酯80含量测定方法，按国家药品审评中心[S]GPH1-1《生物制品质量控制分析方法验证技术审评一般原则》【1】进行方法学验证并检测多批样品，为该项质量标准的制定提供依据。方法：参考《中国药典》2015年版通则3203聚山梨酯-80残留量测定法【2】，采用紫外-可见分光比色法测定rhCNB制剂中聚山梨酯80含量。结果：重复性试验RSD值0.18%，中间精密度试验RSD值0.18%，准确度试验平均回收率100.7%。结论：本法适用于rhCNB聚山梨酯80含量测定。

关键词:紫外-可见分光光度法；rhCNB；聚山梨酯-80含量;

0引言

聚山梨酯80在rhCNB制剂中起助溶剂和稳定剂作用，聚山梨酯80含量是本品制剂的一项重要质控指标，如含量过低的作用，则影响本品的溶出，含量过高则可能会产生溶血等危害。因此准确控制含量十分重要。

1仪器、试剂、对照品

仪器与用具：电子天平AL104（梅特勒）、紫外-可见分光光度计(北分瑞利UV-2600)。试剂：二氯甲烷、乙醇、氯化钠、硝酸钴、硫氰酸铵。以上均为分析纯。供试品：6批注射用rhCNB，批号20160402对照品：聚山梨酯80购自贵州迪大科技，批含量为98.07%。

2测定方法

2.1溶液配制。

【乙醇-氯化钠饱和溶液】取乙醇200ml，加入氯化钠4g，振摇使成饱和溶液。

【硫氰钴铵溶液】称取硝酸钴6.0g、硫氰酸铵40.0g，加水溶解并稀释至200ml。

2.2测定法。取注射用rhCNB制剂供试品粉末约35mg，精密称定，分别置离心管中，加水1ml使溶解，再加入乙醇-氯化钠饱和溶液10ml。摇匀，以每分钟3000转离心10分钟，取上清液，再用乙醇-氯化钠饱和溶液2.0ml小心冲洗管壁，洗液与上清液合并，以每分钟3000转离心10分钟。上清液置离心管中，置55℃水浴中，用空气吹扫法将其浓缩至0.1～0.5ml，加2ml水溶解，准确加入二氯甲烷4.0ml,硫氰钴铵溶液6.0ml，加塞，混匀，室温放置1.5小时，每15分钟振荡1次，测定前静置半小时，弃上层液，照紫外-可见分光光度法，在波长620nm处测定下层二氯甲烷的吸光度。将供试品吸光度带入直线回归方程，求得供试品聚山梨酯80含量(mg/ml)。

3方法学验证

3.1线性试验。精密称取聚山梨酯-80228.38mg至100ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。精密量取聚山梨酯-80对照品溶液300μl、400μl、500μl、600μl、700μl，加入预先加入2ml水的离心管中混匀，准确加入二氯甲烷4.0ml、硫氰钴铵溶液6.0ml，加塞，混匀，室温放置1.5小时，每15分钟振荡1次，测定前静置半小时，弃上层液，照紫外-可见分光光度法，在波长620nm处测定下层液的吸光度（以二氯甲烷为空白）。以上述聚山梨酯-80系列浓度对其相应的吸光度作直线回归，求得直线回归方程，其相关系数为0.9974，表明本法检测聚山梨酯-80含量在0.1713mg/ml～0.3997mg/ml内线性关系良好。

图1标准曲线图

3.2精密度试验。

3.2.1重复性：取线性试验第3点聚山梨酯-80对照品溶液，按照上述检测条件和方法测定六次，以吸光值计算相对标准偏差RSD。计算得RSD为0.18%，表明试验方法精密度良好。

表1重复性试验结果

3.2.2中间精密度试验：次日换不同检验人员，仍取线性考察项下第3点聚山梨酯-80对照品溶液，按照上述检测条件和方法测定6次，以吸光值计算相对标准偏差RSD。计算得RSD为0.18%，表明试验方法精密度良好。

表2中间精密度试验结果

编号

1

2

3

4

5

6

均值

SD

RSD%

测定值

0.461

0.460

0.460

0.459

0.459

0.459

0.460

0.0008

0.18

编号

1

2

3

4

5

6

均值

SD

RSD%

测定值

0.474

0.474

0.474

0.474

0.475

0.475

0.474

0.0008

0.18

3.3准确度试验：聚山梨酯-80对照品溶液：精密称取聚山梨酯-80对照品219.60mg，置100ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，制成每1ml相当于聚山梨酯-802.1960mg的溶液，摇匀。

聚山梨酯-80辅料空白溶液配制：蔗糖3.0g，海藻糖3.0g，甘露醇10.0g，色氨酸0.5g，氯化钙0.2g，置500ml量瓶中，加水适量使溶解并稀释至刻度。

量取未加聚山梨酯-80的辅料空白溶液9份，每份1.8