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选修1教材解读

实验一大肠杆菌的培养和分离

【教材解读】

1.微生物

①细菌：是原核生物，与真核细胞相比，细菌没有核膜包被的细胞核，其细

胞壁由肽聚糖组成。

②大肠杆菌：是革兰氏阴性、异养兼性厌氧的肠道杆菌。大肠杆菌在基因工

程技术中被广泛的应用，它的质粒是最常用的运载体，它也是基因工程中常

用的受体细胞。

【注意：根据细胞壁结构的不同，细菌可分成革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌

两类；革兰氏阳性菌细胞壁厚，无荚膜，多产生外毒素；如：金黄色葡萄球

菌、炭疽芽孢杆菌。革兰氏阴性菌细胞壁薄，有荚膜，多产生内毒素；如：

大肠杆菌】

③绝大多数微生物与传染病无关，90%以上的微生物是对人类有利的。

2.培养基配置

①微生物的生命活动需要五大营养要素：水、无机盐、碳源、氮源、生长因

子；

②有的物质既是碳源又是氮源（为微生物生长提供碳元素和氮元素），如：

蛋白质、蛋白胨；

③有的既是碳源又是生长因子（是微生物生长不可缺少的微量有机物），如：

酵母提取物；

④“细菌喜荤，霉菌喜素”；细菌喜37℃的温度；霉菌喜25-30℃的温度；

⑤细菌的培养基：蛋白胨、酵母提取物、一定量的氯化钠，以维持一定的渗

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选修1教材解读

透压；通常在中性偏碱的环境中生长；

⑥霉菌的培养基：一般用无机物配制或添加蔗糖的豆芽汁即可；通常在中性

偏酸的环境中生长；

⑦在提供上述几种主要营养物质的基础上，培养基还需要适宜的pH、温度以

及特殊营养物质，以满足微生物生长对的要求。

3.培养基的种类及用途：

①液体培养基：呈现液态，用于扩大培养和工业生产；

②固体培养基：配制时需加入琼脂（凝固剂），呈固态，用于菌种分离、鉴

定、计数等；

③我们一般用LB液体培养基来扩大培养大肠杆菌，用LB固体培养基来分离

大肠杆菌。

4.灭菌和消毒（重点内容）

①无菌技术：人们利用微生物完成一定的反应，必须要求某种微生物是没有

被其他微生物污染的，因此，在培养微生物时必须进行无菌操作；

②灭菌是用物理或化学的方法，杀死或除去环境中的一切微生物的方法。杀

死病原菌的方法叫消毒。如：实验室要对使用前和使用后的培养基、各种容

器进行灭菌；要对实验服、对病人的排泄物和衣物进行消毒。

③干热灭菌法：是利用火焰将接种环和试管上的微生物烧死（又称灼烧灭菌

法），或在140-160℃的烘箱中加热2-3h，将微生物的营养体和芽孢杀死。【注

意：干热灭菌法只适用于金属或玻璃用具】

④加压蒸气灭菌法（高压蒸气灭菌法）：这是生产和实验室常用的灭菌法，

将灭菌锅内通入压力达到1000g/cm2的高压蒸气，锅内温度达121℃，持续

15-30min，即可达到灭菌目的；

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选修1教材解读

注意：当培养基内有葡萄糖时，为防止葡萄糖分解碳化，要用500g/cm2压力

（90℃以上）灭菌30min。⑤过滤灭菌法：有些化合物（尿素、碳酸氢钠等）

加热会分解，如培养基中需要时，只能配成溶液单独过滤灭菌；通常用G6玻

璃砂漏斗过