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Biota

Biotage

快速制备色

谱讲义

Biotage快速制备色谱仪的使用及样品成分的分离

一， 实验目的：

1，学习掌握

作

Biotage快速制备色谱仪的原理及使用操

2，了解Biotage快速制备色谱仪器的结构

3，学习利用

离

Biotage快速制备色谱仪对混合样品的分

生保留时间不同和实现分离。

生保留时间不同和实现分离。

二， 实验原理：

利用样品混合物中各组分理、化性质的差异，各

利用样品混合物中各组分理、化性质的差异，各

组分程度不同的分配到互不相溶的两相中。当两相相

组分程度不同的分配到互不相溶的两相中。当两相相

对运动时，各组分在两相中反复多次重新分配，结果使混合物得到分离。两相中，固定不动的一相称固定相；移动的一相

对运动时，各组分在两相中反复多次重新分配，结果

使混合物得到分离。

两相中，固定不动的一相称固定相；移动的一相

称流动相。固定相是固体吸附剂，吸附剂是多孔性微

称流动相。固定相是固体吸附剂，吸附剂是多孔性微

粒物质表面有吸附中心。样品组分与流动相竞争吸附

粒物质表面有吸附中心。样品组分与流动相竞争吸附

中心。各组分的吸附能力不同，使组分在固定相中产

中心。各组分的吸附能力不同，使组分在固定相中产

制备色谱法其目的在于分离制备一种或多种纯组分，用于进一步的定性鉴定、化学合成或制备高纯标准物。可分为工业用大规模制备纯物质的生产制备色谱和实验室分离几毫克至几克样品，以便鉴定色谱图中未知峰的小型制备色谱。实验室制备色谱除了用柱色谱外还有制备薄层色谱。制备色谱法可以完成一般分离方法难以完成的纯物质制备，如纯化学试剂、合

制备色谱法其目的在于分离制备一种或多种纯组分，用于进一步的定性鉴定、化学合成或制备高纯标准物。可分为工业用大规模制备纯物质的生产制备色谱和实验室分离几毫克至几克样品，以便鉴定色谱图中未知峰的小型制备色谱。实验室制备色谱除了用柱色谱外还有制备薄层色谱。制备色谱法可以完成一般分离方法难以完成的纯物质制备，如纯化学试剂、合

成中间体、蛋白质的纯化等。

三，

仪器与试剂：

1，仪器，Biotage快速制备色谱仪；2，试剂，苯甲醛，邻氯苯甲醛，环己烷，乙酸乙酯

四， 实验步骤：

打开系统电源开关，启动仪器；

1、

当进入主界面后，点击Chemistry；

2、

点击Lamp On。紫外灯需要 7.5分钟的预热时

3、

间；

选择右下角Solvents界面，给需要使用的溶剂指

4、

定相应的溶剂进口，至少两种溶剂；

进入方法编辑界面（Method tab），点击New或

5、

者 Open以建立方法。

在参数编辑Parameters界面，选择溶剂体系，柱

6、

子cartridge的大小以及收集架子的类型。流速 flowrate是默认的，输入完点击OK；

在收集方式Collection界面，选择紫外检测器

7、

的波长，collection wavelength为命令收集波长，monitor

8、wavelength为检测波长（可观察化合物在此波长条件下的吸收情况），两种波长范围皆为200～320nm，输入完点击OK；

9、选择收集模式collectionmode，里面共有六种收集模式，最常用的为CollectAll全收集,Threshold域

10、值收集一般设置为50mAU，manual手动收集，其它三种不常用。推荐Threshold域值收集，输入完点击OK；

11、最后为RackAllocation试管收集架设置，仪器标配 RackType116×150aluminumBLK-016，DispenseOrder 为机械臂走动模式，Max

Fraction Volume为试管最大收集体积，按默认值就可以，输入完点击OK；

12、在梯度编辑Gradient界面，检查洗脱梯度，可以直接在梯度图上进行拖动修改；

13、如果需要保存方法设置，点击Save；

14、然后点击 Run就可以自动过柱了。五，注意事项：

确保所有管路接通完好

选择合适的柱子及展开剂

及时添加洗脱剂，防止仪器无溶剂工作，以免影响仪器使用寿命。

Biotage快速制备色谱仪系精密贵重仪器，在未熟悉仪器的性能及操作方法之前，不得随意拨动主机的各个开关和旋钮。

仪器在开、关机时必须严格按照操作方法进行。