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细菌内毒素检测标准操作--第1页
细菌内毒素检测（凝胶法）标准操作
目的：规范细菌内毒素的检测操作，保证细胞质量。
范围：适用于所有从治疗中心发放的细胞（包括CIK、DC、干细胞等）内毒素
限量检测。
责任人：质量检测人员
材料：
一、电热干燥箱除外源性内毒素用，温度应能达到180℃。
二、恒温水浴箱或适宜的恒温器（37℃±1℃）。
三、水银温度计，精度在1℃以下，量程不小于50℃。
四、旋涡混合器。
五、可调式移液器
六、0.25EU/ml鲎试剂。
七、细菌内毒素工作品。
八、凝胶法细菌内毒素检查用水。
九、实验用具无热原吸头（1000μl、200μl）、带铝盖的凝集管（10mm×75mm）、
试管架、计时器、75%酒精棉球、封口膜、剪刀、镊子、砂轮。所用玻璃器皿使
用前须经250℃干烤至少1小时或180℃干烤至少4小时。
操作方法
一、取样
1、细胞发放前3天，取细胞培养液约2ml，分装于2个带铝盖的凝集管中各约
1ml左右，如不立即试验4℃存放（可存放多长时间）。
2、细胞发放当天，取细胞生理盐水混悬液约2ml，分装于2个带铝盖的凝集管
中各约1ml左右，如不立即试验4℃存放。（可存放多长时间）。
3、取样应以无菌操作技术取样，所用器材在使用前应无热原或已去除热原。
二、鲎试剂灵敏度复核
鲎试剂灵敏度复核的目的是考察鲎试剂的灵敏度是否正确、考察检验人员操作方
法是否正确及实验条件是否符合规定。
在使用一批新的鲎试剂或试验条件发生了任何可能影响检验结果的改变时，应进
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行鲎试剂灵敏度复核实验。
（一）实验操作
1、细菌内毒素工作品溶液的制备
取细菌内毒素工作品一支，轻弹瓶壁，使粉末落入瓶底，然后用砂轮在瓶颈上部
轻轻划痕，75%酒精棉球擦拭后启开，开启过程中应防止玻璃屑落入瓶内。
按照工作品说明书，加入规定量的细菌内毒素检查用水溶解其内容物，用封口膜
将瓶口封严，置旋涡混合器上混合15分钟。然后用倍倍稀释方式进行稀释，即
0.5ml各浓度工作品溶液+0.5ml检查用水（以下稀释方式同此法），制备成4个浓
度的细菌内毒素标准溶液，即2.0λ、0.5λ、0.25λ（λ为所复核的鲎试剂的标
示灵敏度），每稀释一步均应在旋涡混合器上混合30秒钟。
2、待复核鲎试剂的准备
取0.1ml/支的鲎试剂18支，轻弹瓶壁，使粉末落入瓶底，用砂轮在瓶颈轻轻划
痕，75%酒精棉球擦拭后启开备用，防止玻璃屑落入瓶内。每支加入0.1ml检查
用水溶解，轻轻转动瓶壁，使内容物充分溶解，避免产生气泡。若待复核鲎试剂
的规格不是0.1ml/支时，取若干支按其标示量加入检查用水复溶，充分溶解后将
鲎试剂溶液混合在一起，然后每0.1ml分装到10mm×75mm凝集管中，要求至
少分装18管备用。
3、加样
将已充分溶解的待复核鲎试剂18支（管）放在试管架上，排成5列，其中4列
4支（管），1列2支（管）。4支（管）4列每列每支分别加入0.1ml的2λ、λ、
0.5λ和0.25λ的内毒素标准溶液；另2支（管）加入0.1ml检查用水。
4、加样结束后，将鲎试剂用封口膜封口，轻轻振动混匀，避免产生气泡，连同
试管架放入37℃±1℃水浴或适宜恒温器中，试管架保持水平状态，保温60±2
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