高粱花叶病毒RT-PCR检测技术规程.pdfVIP

ICS65.020

CCSB15

53

云南省地方标准

DB53/TXXXX—2022

高粱花叶病毒RT-PCR检测技术规程

2022-XX-XX发布2022-XX-XX实施

云南省市场监督管理局发布

DB53/TXXXX—2022

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定

起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由云南省农业科学院甘蔗研究所提出。

本文件由云南省农业标准化技术委员会（YNTC07）归口。

本文件起草单位：云南省农业科学院甘蔗研究所。

本文件主要起草人：李婕、黄应昆、单红丽、王晓燕、张荣跃、仓晓燕、王长秘、尹炯、罗志明。

I

DB53/TXXXX—2022

高粱花叶病毒RT-PCR检测技术规程

1范围

本文件规定了高粱花叶病毒RT-PCR检测方法中涉及的仪器与耗材、试剂、检测样品的取样及对照设

置、检测方法和结果判定等。

本文件适用于高粱花叶病毒（Sorghummosaicvirus，SrMV）侵染的植物样品的RT-PCR检测。

2规范性引用文件

本文件没有规范性引用文件。

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

高粱花叶病毒Sorghummosaicvirus

高粱花叶病毒（Sorghummosaicvirus，SrMV）属于马铃薯Y病毒科（Potyviridae）马铃薯Y病毒属

（Potyvirus），是引起甘蔗花叶病的主要病毒之一，英文名称为Sorghummosaicvirus，缩写为SrMV，

参见附录A。

3.2

RT-PCR

反转录聚合酶链式反应（ReverseTranscriptionPolymeraseChainReaction，RT-PCR）的简称，是一

种在体外利用反转录酶将RNA反转录为cDNA，再以cDNA为模板进行PCR扩增，以获得RNA特定片段。

4仪器与耗材

4.1仪器

主要仪器包含电子天平、恒温水浴锅、高速台式冷冻离心机、蛋白/核酸分析仪、PCR扩增仪、涡

旋混匀器、微波炉、电泳仪、水平电泳槽、凝胶成像仪、可调微量移液器、研钵等。

4.2耗材

无核酸酶（Nuclease-free）的1.5mL和2.0mL离心管及0.2mLPCR管等。

5试剂

5.1常规试剂

液氮、焦碳酸二乙酯（DEPC）灭菌水或者RNase-free水、植物总RNA提取试剂盒、三氯甲烷、70%

乙醇、异丙醇、无水乙醇等。

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DB53/TXXXX—2022

5.2RT-PCR试剂

Oligo(dT)18引物（0.5µg/µL），RT-PCR反转录试剂盒，含溴酚蓝染料的2×EasyTaqPCRSuperMix

聚合酶混合物。

5.3引物

5.3.1上游引物SrMV-F：5′-CATCARGCAGGRGGCGGYAC-3′，下游引物SrMV-R：5