乳铁蛋白基因的获取.pdfVIP

摘要：本实验通过基因工程的方法进行编码目的基因的DNA的制

备，主要通过以下形式：真核生物mRNA的获取、表达乳铁蛋白的

mRNA获取纯化、通过mRNA反转录cDNA等一系列步骤完成。

关键字：目的基因获取基因工程乳铁蛋白

cDNA的制备PCR技术

目录

一、实验目的······················2

二、真核生物组织中获取基因简介····2

三、RNA的获取···············3

四、相应DNA的获取处理···········4

五、获取编码目的基因的mRNA方法·4

六、cDNA获取·····················5

七、心得体会·······················6

八、参考文献·······················6

RT-PCR法获取人乳铁蛋白基因

一、实验目的

乳铁蛋白出现在动物乳，特别是初乳中，为婴幼儿提供多种生物功能，尤

其是调节免疫和对病原微生物的抵御功能。乳铁蛋白是从牛乳中提取的一种安

全可靠的天然物质，其在食品方面的应用已得到许多国家和地区法律的承认。

随着乳铁蛋白作用机制的不断阐明和开发应用范围的扩大，乳铁蛋白在疾病防

治、营养补充、食品和药品防腐、化妆品等方面有广阔的应用前途。基于众多

的研究成果和试验，在婴幼儿配方食品中添加乳铁蛋白带来重大意义。在婴幼

儿配方奶粉中添加乳铁蛋白，既可满足婴儿生长发育的需要，同时又对婴儿的

健康起到保护作用。目前在全球的农业发达国家像新西兰、瑞士、澳大利亚、

荷兰等，不仅拥有着全球最优质的奶源，而且，更加注重免疫、吸收等功能效

果。在这些国家的高端婴幼儿配方奶粉当中，多数有添加乳铁蛋白这一重要的

母乳成分，例如瑞士百立乐金装婴幼儿配方奶粉、美素奶粉等。

应用人群

1.孕产妇：孕产妇补充乳铁蛋白，可以提高其抵抗力，有效预防或治疗孕

期、哺乳期的细菌、病毒性感染；同时，促进铁吸收，预防孕产妇贫血。2.非

母乳喂养、混合喂养的婴幼儿：乳铁蛋白是母乳中的核心免疫蛋白，能帮助婴

幼儿抵抗细菌、病毒等有害微生物，预防病毒引起的呼吸道感染及腹泻等婴儿

常见疾病；同时还可以促进婴儿的生长发育和增强造血功能，为婴儿构筑起健

康成长的第一道防线，“吃母乳的宝宝少生病”正是这个道理。遗憾的是，目前

市场上的婴幼儿配方奶粉中很少有添加乳铁蛋白的产品，这也是配方奶粉与母

乳的最本质区别。因此，对非母乳喂养儿、混合喂养儿，食用配方奶粉的同时，

额外补充乳铁蛋白，可以大大改善配方奶粉的不足，使其营养成分更趋向于母

乳！3.缺铁性贫血者：乳铁蛋白能高效促进铁吸收，临床试验证明，铁与乳铁

蛋白结合后吸收率是单纯补铁的4倍。缺铁性贫血者在补铁时配合摄入乳铁蛋

白，可达到减少铁制剂摄入量，增强补铁效果的作用，同时，由于乳铁蛋白的

摄入，还可以明显缓解铁对肠道的刺激。4.免疫力低下者：体弱多病者大多抵

抗力低下，乳铁蛋白能够帮助他们激发、建立、修复、完善免疫系统，增强抗

病能力。

人体实验

1.有助于肠道比菲德氏菌的繁殖。2.除了干扰素外，乳铁蛋白是第一个被

发现具有抗C型肝炎的活性物质，可以减少血浆中HCV-RNA值（其值可作为

C型肝炎病毒活性高低的评估）。3.减少导致胃溃疡重要原因幽门螺旋杆菌

H.pylori的数目

二、真核生物中基因获取方法简介

目的基因制取策略有直接获取和间接获取。对于一些低等的生物一般用直接法，

而像人这样的高等动物，基因组比较复杂，而且还没有研究清楚，所以一般用

间接获取法。常用的有人工合成法，逆转录PCR法，构建基因文库法等。其中

以逆转录PCR（RT-PCR）法最常用。

逆转录PCR（RT-PCR）的基本步骤如下：

1，总RNA的提取

2，mRNA的纯化

3，第一链cDNA的合成

4，PCR扩增

三、RNA的获取

实验方案：用氯化锂－尿素从乳房组织中分离RNA。此法成功的关键：组织匀

浆时间短，能够在一分钟内完成。这期间将试管浸没在冰水中。

1、实验前所有缓冲液和试管必须预冷到4℃，保证核酸酶的活性最

低

2、将称量盘置于干冰上放置数分钟，使组织样品没有融合就可以精