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牙膏中沃氏葡萄球菌的分离与鉴定

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论文导读：血浆和肉汤培养物混匀培养6h之内不凝固，结果显示血浆凝固酶阴性，而金黄色葡萄球菌阳性对照、阴性对照、肉汤对照结果分别为阳性、阴性和阴性。将血平板上少量溶血菌落划线接种于营养琼脂，挑取菌落制成菌悬液，用GP鉴定卡通过VITEK2全自动微生物鉴定系统进行鉴定。

关键词：葡萄球菌，分离，鉴定，生化鉴定

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葡萄球菌属广泛的分布于自然界，是一种革兰氏阳性的球形细菌，显微镜下排列成葡萄串状，是医院感染的重要病原菌。论文参考网。论文参考网。沃氏葡萄球菌是葡萄球菌属的一种，有报道从人外伤分泌物中分离出沃氏葡萄球菌[1]，并有沃氏葡萄球菌致动脉栓塞的报道[2]。但也有学者在难治性牙周炎的龈下菌丛中发现了沃氏葡萄球菌[3-4]，并认为沃氏葡萄球菌是牙周致病菌[5]，王艳等[6]应用PCR技术克隆了沃氏葡萄球菌尿素酶基因的保守序列。但有关沃氏葡萄球菌的研究很少，本文在对牙膏进行金黄色葡萄球菌检测时，检出沃氏葡萄球菌，并对其生化特性进行研究，以期为今后沃氏葡萄球菌的研究提供参考。

1材料与方法

1.1材料

检验样品为旅游用牙膏（3g/支），来自送检样品，包装完好。

1.2仪器和设备

所有试验用培养基均购自北京陆桥技术有限责任公司，VITEK2全自动微生物分析系统及相关配套试剂购自法国生物梅里埃公司。

1.3方法

检验方法依据《化妆品卫生规范》（2007版）中金黄色葡萄球菌检测方法进行。操作步骤为：

2结果与分析

2.1菌落观察

菌落在BairdParker培养基上呈圆形、光滑、较湿润，颜色为灰黑色，周围有晕圈；在血琼脂平板上菌落为圆形，灰白色，表面光滑，有少量溶血。

2.2革兰氏染色镜检

将可疑菌落进行革兰氏染色，染色镜检为革兰氏阳性菌，排列成葡萄状，无芽孢和荚膜。

2.3甘露醇发酵试验

将菌落接种于甘露醇发酵培养基中，36℃±1℃培养24h±2h，结果显示不能发酵甘露醇产酸。

2.4血浆凝固酶试验

血浆和肉汤培养物混匀培养6h之内不凝固，结果显示血浆凝固酶阴性，而金黄色葡萄球菌阳性对照、阴性对照、肉汤对照结果分别为阳性、阴性和阴性。

2.5VITEK2生化鉴定

将血平板上少量溶血菌落划线接种于营养琼脂，挑取菌落制成菌悬液，用GP鉴定卡通过VITEK2全自动微生物鉴定系统进行鉴定。生化编码为271，判定为沃氏葡萄球菌（可能性为94%），具体生化结果见表1。

表1沃氏葡萄球菌VITEK2鉴定结果

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生化名称

结果

生化名称

结果

AMY

苦杏仁苷

-

URE

尿素酶

+

PIPLC

磷脂酰磷脂酶C

+

POLYB

多粘菌素B耐受性

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dXYL

D-木糖

-

dGAL

D-半乳糖

-

ADH1

精氨酸双水解酶1

-

dRIB

D-核酸

-

BGAL

β-D-半乳糖苷酶

-

ILATK

L-乳糖盐产碱

-

AGLU

α-葡萄糖苷酶

-

LAC

乳糖

-

APPA

丙氨酸-苯丙氨酸-脯氨酸芳胺酶

-

NAG

N-乙酰-D-氨基葡萄糖

-

CDEX

环式糊精

-

dMAL

D-麦芽糖

-

AspA

L-天冬氨酸芳胺酶

-

BACI

杆菌肽耐受

-

BGAR

β-半乳糖吡喃糖苷酶

-

NOVO

新生霉素耐受

-

AMAN

α-甘露糖苷酶

-

NC6.5

6.5%NaCl生长

+

PHOS

磷酸酶

-

dMAN

D-甘露醇

+

LeuA

亮氨酸芳胺酶

-

dMNE

D-甘露糖

-

ProA

L-脯氨酸芳胺酶

-

MBdG

甲基-B-D葡萄糖吡喃苷

-

BGURr

β-葡萄糖醛酸酶

+

PUL

支链淀粉

-

AGAL

α-半乳糖苷酶

-

dRAF

D-棉子糖

-

PyrA

焦谷氨酸芳胺酶

-

O129R

O/129耐受

+

BGUR

β-D-葡萄糖醛酸酶

-

SAL

水杨素

-

AlaA

丙氨酸芳胺酶

-

SAC

蔗糖

+

TyrA

酪氨酸芳胺酶

-

dTRE

D-海藻糖

+

dSOR

D-山梨酸

-

ADH2s

精氨酸双水解酶2

+

OPTO

奥普托欣耐受

+

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3讨论

葡萄球菌属主要存在于环境及人与动物的皮肤和粘膜上，是医院感染中的重要病原菌。在牙膏卫生指标中，金黄色葡萄球菌是必检项目之一，对沃氏葡萄球菌还没有相应的检测要求。论文参考网。沃氏葡萄球菌是牙周致病菌[5]，且其治病机制可能与该菌分解唾液和龈沟液中的尿素产生氨，增加龈下牙石的沉积，以及对牙周成纤维细胞的抑制作用有关。本研究在牙膏中检出沃氏葡萄球菌，且经VITEK2全自动微生物鉴定系统鉴定为尿素酶反应阳性，牙膏中沃氏葡萄球菌污染是否可直接导致口腔疾病还有待进一步研究。

牙膏是人们生活中不可缺少的日用品之一，而宾馆用小牙膏的需求也随着旅游业的飞速发展而快速加大。在牙膏的生产过