血红蛋白的提取和分离-完整版PPT课件.ppt

(3)样品的加入↓(4)洗脱：下端出口，加入磷酸缓冲液，连接，_____下端出口，进行洗脱①加样前：打开流出口，使柱内凝胶面上的缓冲液缓慢下降到与凝胶面，关闭出口②加样：用吸管小心地将1mL透析后的样品加到色谱柱的，注意不要破坏凝胶面③加样后：打开下端出口，使样品渗入内平齐顶端凝胶床关闭缓冲液洗脱瓶打开收集得到的纯化后的蛋白4.SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳——纯度鉴定判断纯化的蛋白质是否达到要求，需要进行的鉴定。鉴定方法中，使用最多的是。5.操作提示(1)红细胞的洗涤：、离心速度与十分重要。洗涤次数过少，无法除去蛋白；离心速度过高和时间过长会使白细胞等一同沉淀，达不到分离的效果。蛋白质纯度SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳洗涤次数离心时间血浆(2)色谱柱填料的处理：商品凝胶使用前需直接放在中膨胀，可以将加入洗脱液的湿凝胶用沸水浴加热，加速膨胀。(3)凝胶色谱柱的装填：在装填凝胶柱时，不得有气泡存在。气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的，降低。(4)蛋白质的分离：如果红色区带均匀一致地移动，说明色谱柱制作成功。洗脱液洗脱次序分离效果问题探究1.实验操作过程(1)材料的选择：与其他真核细胞相比，哺乳动物成熟红细胞有什么特点？这一特点对你进行蛋白质的分离有什么意义？答案①没有细胞核和各种复杂细胞器，排除其他物质对实验结果的干扰。②血红蛋白有色，可观察颜色来判断什么时候该收集洗脱液。分离过程直观，简化了操作。答案答案去除血浆蛋白；离心后的上清液不再呈现黄色。(2)洗涤红细胞的目的是什么？你如何知道红细胞已洗涤干净？答案①蒸馏水使红细胞吸水涨破，释放血红蛋白；②甲苯是有机溶剂，溶解细胞膜，有助于血红蛋白释放。(3)在血红蛋白释放过程中，蒸馏水和甲苯的作用分别是什么？答案(4)血红蛋白释放后的混合液经离心后分为哪几层？如何获得血红蛋白溶液？答案①分为4层：从上往下数，第1层为无色透明的有机溶剂(甲苯)，第2层为白色的脂类物质，第3层为红色透明的血红蛋白溶液，第4层为暗红色的红细胞破碎物沉淀。②分层的液体→过滤除去脂溶性沉淀层→分液得下层的血红蛋白溶液。答案(5)将收集的血红蛋白溶液放在透析袋中进行透析，透析的目的是什么？答案去除相对分子质量较小的杂质。2.凝胶色谱操作(1)在制作凝胶色谱柱时，凝胶色谱柱的高度不足或直径过大对洗脱效果分别有何影响？答案①高度不足会导致达不到分离效果；②直径过大会导致洗脱液体积大，样品稀释度大，使实验现象不明显。答案(2)试从凝胶色谱的分离原理分析，凝胶的装填为什么要紧密、均匀？答案防止形成无效空隙，样品小分子从空隙中通过，搅乱洗脱液的洗脱次序，影响分离效果。亚硝酸盐含量升高是因为蔬菜组织和细菌内硝酸还原酶将硝酸盐还原为亚硝酸。亚硝酸盐含量降低的原因是硝酸还原酶活性减弱，亚硝酸盐还原减少并且被微生物利用。*血红蛋白的提取和分离二轮复习专题DNA和蛋白质技术血液血浆水分固体物质：血浆蛋白、无机盐、磷脂、葡萄糖等血细胞白细胞血小板红细胞（最多）血红蛋白（90％）两个α－肽链两个β一肽链四个亚铁血红素基团2.问题：血液有哪些成分？1.问题：用鸡的红细胞提取DNA，用人的红细胞提取血红蛋白的原因是什么？鸡的红细胞具有细胞核，含有DNA，便于进行DNA的提取；人的红细胞无细胞核，结构简单，血红蛋白含量丰富，便于提取血红蛋白。血红蛋白两个α－肽链两个β一肽链四个亚铁血红素基团每个肽链环绕一个亚铁血红素基团，此基团可携带一分子氧或一分子二氧化碳，血红蛋白因含有血红素而呈红色。血红蛋白的特点：一、蛋白质的分离技术基础梳理1.蛋白质的分离依据根据蛋白质各种特性的差异，如分子的形状和、所带的性质和多少、溶解度、和对其他分子的亲和力等，可以用来分离不同种类的蛋白质。2.凝胶色谱法(1)概念：也称做，是根据