再生污水的大肠菌群检测方法比较研究.docx

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再生污水的大肠菌群检测方法比较研究

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摘要：本文主要针对再生污水大肠菌群检测方法进行比较与研究，重点结合3个水厂进出水水样与比较洁净的水样作为比较对象。通过运用总大肠菌群、粪大肠菌群等检测方法进行论证与对比分析，根据试验结果比较不同检测方法的优势和劣势。并在此基础上，对再生污水大肠菌群检测方法的使用情况进行总结与归纳，以供参考。

关键词：再生污水；大肠菌群；检测方法；比较；

前言：水源作为微生物赖以生存的环境，不管是地表水，还是地下水当中，都存在大量微生物。当水体受到外界影响时，如人畜粪便、生活污水等影响，会进一步加剧水体中微生物繁殖，导致微生物含量升高。根据水的细菌学指标测定分析可知，通过实施肠道细菌检验工作在某些层面上会对总大肠菌群与粪大肠菌群产生一定影响。究其原因，主要是因为总大肠菌群与粪大肠菌群基本上可以视为微生物学指标的衡量指标，对环境质量评价、环境监管等方面起到不可估量的作用。目前，像多管发酵法、滤膜法以及酶底物法被广泛用于大肠菌群检验工作当中，取得的应用效果比较显著，值得推广与应用。

1试验准备工作

目前，大肠菌群检验主要以多管发酵法、滤膜法以及酶底物法为主。其中，多管发酵法适用于于各种水体环境检测。大量试验数据显示，该检测方法检测结果准确度高，但是操作流程比较复杂、试验时间较长。酶底物法属于一种新兴的检测方法，涉及到的操作流程较为简单[1]。滤膜法相较于前两种方法而言，流程简单且检测迅速，但是更加适用于杂质较少的水体检测。为比较出哪一种方法更具高效性与准确性，我们需要事先做好试验准备工作，以便后续试验工作的顺利开展。

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培养基

在培养基的选择方面，本试验主要以单倍乳糖蛋白胨培养基、品红亚硫酸钠培养基、M-FC培养基为主要材料。

首先，在单倍乳糖蛋白胨培养基材料的选择方面，主要集中以大豆蛋白胨、牛肉浸膏、乳糖、氯化钠以及溴甲酚紫乙醇为主。在含量问题的选择方面，分为为10g、3g、5g、5g、1ml。另外，在蒸馏水用量的选择上，应该加到1000ml左右为主[2]。

其次，品红亚硫酸培养基主要针对多管发酵法、滤膜法而言。二者在培养基材料含量的选择方面存在一定差别。在成分方面基本无明显区别，主要使用大豆蛋白胨、乳糖、琼脂、磷酸氢二钾、无水亚硫酸钠、碱性品红乙醇溶液等。但是在成分含量的选择方面，需要结合具体检测方法要求进行确定。

最后，M-FC培养基主要针对滤膜法而言。在培养基材料的选择方面，主要以大豆蛋白胨、胰胨、酵母浸膏、乳糖、琼脂等材料为主，在溶液配备方面，主要以1%苯胺蓝水溶液、1%玫瑰色酸溶液为主，另外，在蒸馏水用量的选择方面，也以加至1000ml为主[3]。

待选择好材料设备之后，试验人员需要将上述培养基的pH值调节至7.2-7.4之间。并将其放置于115℃温度当中，持续20min灭菌，备用。需要注意的是，酶底物法需要运用MMO-MUG培养基进行测试。

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试验设备

在试验设备的选择方面，主要以电子显微镜、灭菌锅、封口机等基础设备为主。其中，像玻璃器皿等材料设备，需要经干热灭菌（160℃2h）左右才可以进行使用。需要注意的是，试验设备准备过程中必须严格按照设备管理标准进行取拿，防止设备出现污染问题。

2试验过程

2.1试验原理

滤膜法：总大肠菌群与粪大肠菌群需要借助品红亚硫酸钠培养基与M-FC培养的双重作用，才能够完成发酵乳糖的过程。此时，滤膜会出现紫红色菌落现象，而粪大肠菌群则会出现蓝色或者蓝绿色菌落现象。试验人员需要针对菌群菌落情况进行相关记录，重点记录好滤膜生长过程中具备上述特点的菌落数量[4]。

酶底物法：主要利用大肠菌群细菌的分解功能，促使分解过程产生的β-半乳糖苷酶与ONPG发生反应，导致培养液整体呈现出黄色特征。与此同时，大肠埃希氏菌产生的β-葡萄糖醛酸酶会发生分解反应，培养液会在紫外线照射作用下出现荧光反应。试验人员可以根据培养液是否出现荧光反应加以判断。

多管发酵法：根据大肠菌群细菌发酵原理，发酵过程所产生的乳糖会受到环境因素的作用而产酸产气。并且在某些层面上具备革兰氏染色阴性特点，因此在具体判断过程中，可以根据上述三种方法进行确定[5]。

2.2试验方法

滤膜法试验过程需要利用无菌镊子将滤膜边缘放置到对应培养基上面，待滤膜完全贴紧之后，且无明显气泡之后，才可以进行下一步试验。主要将总大肠杆菌与粪大肠菌群放置在恒温箱当中进行培养处理，需要注意的是，培养期间必须确保恒温箱内的湿度问题。最后，挑选符合试验标准的菌群进行试验。

酶底物法试验过程需要利用无菌稀释瓶量取一定量水样溶液加以稀释，并放入一定量培养基粉末，混匀处置之后，将水样全部放入相应定量盘当中。按照总大肠菌落检测方法进行测验，如果孔穴内