酶工程制药技术 (2).ppt

抑制剂-可逆性抑制第31页,共56页，星期六，2024年，5月中毒、解毒巯基酶抑制羟基酶抑制剂抑制剂——不可逆抑制第32页,共56页，星期六，2024年，5月抑制剂——不可逆抑制二巯丙醇第33页,共56页，星期六，2024年，5月抑制剂——不可逆抑制解磷定、阿托品第34页,共56页，星期六，2024年，5月第三节药物的酶法生产一、酶的选择1.底物特异性2.pH3.温度4.激活剂和抑制剂5.价格因素第35页,共56页，星期六，2024年，5月第三节药物的酶法生产二、酶的反应条件1.底物浓度对反应速度的影响2.酶浓度对反应速度的影响3.pH对反应速度的影响4.温度对反应速度的影响5.激活剂和抑制剂对反应速度的影响第36页,共56页，星期六，2024年，5月三、酶和细胞的固定化技术（一）固定化酶的制备1.固定化酶的定义——是指限制或者固定于特定空间位置的酶，具体来说，就是指经过物理、化学方法处理，使酶变成不易随水流失的固定化催化剂。制备固定化酶的过程称为酶的固定化。酶可以采用经过分离后高纯度的提纯酶、也可以是菌体细胞碎片上的酶系，甚至可以是死细胞上的酶。第37页,共56页，星期六，2024年，5月三、酶和细胞的固定化技术（一）固定化酶的制备2.固定化酶的特点（1）稳定性很高，可以多次连续使用。（2）产物中不含酶，易于纯化。（3）反应条件易于控制，可实现连续化和自动控制。（4）酶的利用率高，实际使用量较少。（5）比水溶性酶更适合进行多酶反应。（6）固定化酶属于修饰酶，可以改良。第38页,共56页，星期六，2024年，5月（一）固定化酶的制备3.酶和细胞的固定化方法第39页,共56页，星期六，2024年，5月（1）物理吸附法A、物理吸附法的优点：

（1）操作简单

（2）可选用不同的吸附剂

（3）酶失活之后，载体可以再生B、物理吸附法的缺点：

（1）酶的最适吸附量无规律可寻

（2）酶与载体之间的吸附力不强，酶容易脱落。C、常用的吸附剂第40页,共56页，星期六，2024年，5月（2）离子结合法A、离子结合法的优点----操作简单、处理条件温和，酶的活性中心不容易被破坏。B、离子结合法的缺点----载体和酶的结合力较弱、常常发生酶脱落的现象C、常用的离子结合剂树脂----阴离子交换树脂、阳离子交换树脂、多糖类离子交换剂、合成高分子类离子交换剂。每克载体能吸附50-150mg酶蛋白。DEAE-纤维素Amberlite-CG-50Amberlite-XE-97Amberlite-IR-45Dowex-50第41页,共56页，星期六，2024年，5月（3）共价键结合法酶分子上的氨基、羧基、羟基、咪唑基、巯基与载体表面的反应基团形成共价键，因而将酶固定在载体上的方法。A、共价键结合法的优点----酶与载体结合牢固，酶不会发生脱落。B、共价键结合法的缺点----操作复杂、反应条件苛刻，酶的活性中心会遭到部分性的破坏。C、共价键结合法的类别重氮化 迭氮化

酸酐活化法 酰氯法

异硫氰酸酯法 缩合剂法

溴化氰活化法 烷基化法纪

硅烷基化法第42页,共56页，星期六，2024年，5月交联法交联法是采用双功能、或者多功能试剂，使得酶与酶之间发生交联的固定化方法。基团之间的交联通过共价键结合。交联法的优点----交联后的酶活性较高交联法的缺点----反应条件剧烈、酶的回收率低。第43页,共56页，星期六，2024年，5月交联法的类别和内容类别酶与酶交联法酶与辅助蛋白交联法吸附交联法载体交联法内容分子内交联分子间交联酶与辅助蛋白分子之间交联酶与载体之间交联第44页,共56页，星期六，2024年，5月（3）参与交联的酶蛋白功能团和常用的交联剂参与交联的酶蛋白功能团N-末端的α-氨基赖氨酸的ε-氨基酪氨酸的酚基半胱氨酸的巯基组氨酸的咪唑基常用的交联剂戊二醛双重氮联苯胺-2、2-二磺酸1、5-二氟-2、4-二硝基苯已二酰亚胺二甲酯第45页,共56页，星期六，2024年，5月3、包埋法包埋法的优点----不需要改变酶的高级结构，酶的回收率较高。包埋法的缺点----包埋酶容易导致酶的失活，包埋法只适用于小分子底物的反应过程，大分子底物由于无法进入凝胶，故不适用。包埋法分为三类

（1）网格型（2）微囊型第46页,共56页，星期六，2024年，5月（1）凝胶包埋法网格法也称凝胶包埋法，是指将酶包埋在高分子凝胶的细策网格之中。凝胶包埋法是