原花青素对氨基脲致小鼠免疫损伤的修复作用.docxVIP

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原花青素对氨基脲致小鼠免疫损伤的修复作用

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基金项目：长沙医学院大学生创新性课题（长医教[2015]15号-27）

通讯作者：邹学敏，E-mail:865403933@

摘要：目的探讨原花青素(PC)对氨基脲(SEM)致小鼠免疫损伤的修复效果。方法50只SPF级成年小鼠（雌雄各半）随机分成5组：溶剂对照组、SEM染毒组、SEM染毒+低、中、高剂量PC保护组。溶剂对照组小鼠灌胃等体积的蒸馏水；上午SEM染毒组和低、中、高剂量PC保护组小鼠均灌胃同剂量（56.25mg/kg.bw）SEM溶液；下午低、中、高剂量PC保护组小鼠分别按25、50、100mg/kg.bw剂量灌胃PC溶液，每天1次，实验时间均为连续8周。末次染毒24h后，麻醉取血后处死小鼠，分离小鼠胸腺、脾脏计算其脏器系数，测定各组小鼠的吞噬率、吞噬指数、PFC、SI和NK细胞活性的变化。结果与SEM染毒组比较，中、高剂量PC保护组小鼠胸腺、脾脏脏器系数均有升高（P0.05）；经不同剂量PC分别保护后小鼠的吞噬率、吞噬指数、PFC、SI和NK细胞活性均较SEM染毒组有不同程度的升高，且随PC剂量的增加呈剂量-效应关系，其差异均有统计学意义（P0.05）。结论原花青素对氨基脲染毒小鼠致免疫功能损伤均有不同程度的修复效果，其中以高剂量原花青素致其免疫损伤的修复效果更明显。

关键词：原花青素；氨基脲；小鼠；免疫损伤

氨基脲(semicarbazide,SEM)是偶氮甲酰胺及溶解酵素等多种食品添加剂的分解产物,普遍存在于日常生活当中的酸奶酪、肉品生产、蛋的加工及虾类的漂白等环节中[1]。毒理学研究表明，氨基脲对啮齿类动物存在神经、生殖、肝肾、免疫等毒性作用[2,3]。原花青素（Procyanidins，PC)是一种有着特殊分子结构的含有大量酚羟基的一类多酚化合物[4]。在自然界中广泛存在于葡萄、山楂、等植物中，其中以葡萄籽和皮含量最为丰富[5]。有研究证实，原花青素是目前发现的一种最强效的自由基清除剂之一，具有抗氧化剂的作用[6]。在临床上用于抗癌、抗水肿，免疫调节活性，降低毛细血管通透性，抗高血压、抗动脉粥样硬化。原花青素的应用越来越受到人们的关注。鉴于目前国内外还没有采用原花青素修复氨基脲致免疫损伤的报道，本研究拟以原花青素作为保护剂，探讨其对SEM致小鼠免疫功能的影响，为阐明PC修复SEM的免疫损伤提供实验依据。

1材料与方法

1.1实验动物SPF级成年昆明种（KM）小鼠50只，体重26-34克，雌雄各半，由南华大学实验动物部提供（动物生产许可证号SCXK[湘]2004-0009），实验动物使用许可证号：SYSK（湘）2010-0004，小鼠置屏障环境，实验环境温度22～25℃，湿度50％～55％，12h光照交替，实验期间小鼠自由饮水、进食。

1.2主要仪器与试剂恒温水浴箱（ZD-600，上海仪器厂）；电子分析天平（AB204-N型，METTLER公司）；酶标仪（FLX-800型，美国Multiakan公司）；光学显微镜（CK40-F200型，Nikon公司）；CO2培养箱（5400型，NAPCO公司）。原花青素（纯度95%，南京朗泽生物科技公司）；氨基脲（纯度95%，天津北联精细化工厂）；胎牛血清（杭州四季青生物化工有限公司）；新鲜绵羊红细胞（南华大学动物实验中心提供）；新鲜鸡红细胞（南华大学动物实验中心提供）；植物血凝素（PHA，美国Sigma公司）；MTT（溴唑盐，北京索莱宝科技有限公司）。

1.3动物分组与处理50只SPF级成年小鼠（雌雄各半）随机分成5组：溶剂对照组、SEM染毒组、SEM染毒+低、中、高剂量PC保护组。溶剂对照组小鼠灌胃等体积的蒸馏水；上午SEM染毒组和低、中、高剂量PC保护组小鼠均灌胃同剂量（56.25mg/kg.bw）SEM溶液；下午低、中、高剂量PC保护组小鼠分别按25、50、100mg/kg.bw剂量灌胃PC溶液，每天1次，灌胃溶液均用蒸馏水作溶剂，按10ml/kg·bw体积灌胃，实验时间均为连续8周。末次染毒24h后，麻醉取血后处死小鼠，分离小鼠胸腺、脾脏计算其脏器系数，测定各组小鼠的免疫功能指标的变化。

1.4检测指标及方法

1.4.1脏器系数的测定处死小鼠，取出脾脏和胸腺，去除附着物，生理盐水漂洗后用滤纸吸干，准确称取脾脏和胸腺重量，计算其脏器系数：脏器系数（%）＝脏器重量（g）/小鼠体重（g）×100%。

1.4.2脾淋巴细胞增殖反应的测定（MTT法）参照文献提供的方法进行测定。刺激指数（SI）计算：SI=实验组OD值/对照孔OD值。

1.4.3抗体生成细胞的测定（溶血空斑法）参照文献[2]提