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版本号
Annexin
V-EGFP/PI
Apoptosis
Detection
Kit
Annexin
V-EGFP/PI
凋亡检测试剂盒
号:CW2578
保存:2-8
℃避光保存
组分说明
Cat.No.CW2578
KitSize50
4×BindingBuffer10ml
PropidiumIodide,PI500μl
AnnexinV-EGFP250μl
产品简介
AnnexinV-EGFP/PI凋亡检测试剂盒是一种采用AnnexinV-EGFP与PI双染法进行细胞早期凋亡分析的检测试剂盒。
细胞凋亡早期改变发生在细胞膜表面,这些细胞膜表面的改变之一是磷脂酰丝氨酸(PS)从细胞膜内转移到细胞膜外,
使PS在细胞膜外表面。PS是一种带负电荷的磷脂,正常主要存在于细胞膜的内面,在细胞发生凋亡时细胞膜上的这
种磷脂分布的不对称性被破坏而使PS在细胞膜外。AnnexinV具有易于结合到磷脂类如PS的特性,对PS有高度
的亲和性。因此,该蛋白可充当一敏感的探针检测在细胞膜表面的PS。PS转移到细胞膜外不是凋亡所独特的,也可
发生在细胞坏死中。两种细胞方式间的差别是在凋亡的初始阶段细胞膜是完好的,而细胞坏死在其早期阶段细胞膜的完
整性就被破坏。另外一种活细胞非透过性荧光碘化丙啶(PropidiumIodide,PI)不能通过完整的活细胞,但能够对坏
死和凋亡晚期的细胞进行染色,因此通常将AnnexinV与PI配合染色,以区别凋亡早期细胞与坏死细胞和凋亡的晚期细胞。
注意事项
1.细胞时不能用含EDTA的胰酶。
2.本试剂盒需使用流式细胞仪进行检测。
3.需自备PBS和去离子水。
4.荧光均存在淬灭问题,保存和使用过程中请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。
5.PI对有刺激性,请注意适当防护。
6.请穿实验服并戴手套操作。
操作步骤
1.细胞样品的准备:
a.对于贴壁细胞:收集细胞培养液到一离心管内备用。用胰酶细胞,至细胞可以被轻轻用移液管或枪头吹打
下来时,加入前面收集的细胞培养液,吹打下所有的贴壁细胞,并轻轻吹散细胞。再次收集到离心管内。1000×g左右离心
3-5分钟,沉淀细胞。对于特定的细胞,如果细胞沉淀不充分,可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。吸除上清,
可以残留约50μl左右的培养液,以避免吸走细胞。加入约1ml4℃预冷的PBS,重悬细胞,再次离心沉淀细胞,吸
除上清。再次加入1ml4℃预冷的PBS,重悬细胞,再次离心沉淀细胞。
b.对于悬浮细胞:1000×g左右离心3-5分钟,沉淀细胞。对于特定的细胞,如果细胞沉淀不充分,可以适当延长离
心时间或稍稍加大离心力。吸除上清,可以残留
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