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人凝血因子Ⅷ的研究进展

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黄锦程

【摘要】凝血因子Ⅷ是治疗血友病的常见类型，具有良好的耐药性、安全性和疗效。由于凝血因子Ⅷ的半衰期相对较短，通常需要大剂量预防和治疗出血，以及频繁输血，本文综述了延长凝血因子Ⅷ半衰期的研究进展和最重要的技术方法。人凝血因子是人血浆中一种重要的蛋白，用于降低出血的风险。是人体凝血的激活途径的重要蛋白组分之一。低凝血因子Ⅷ水平可导致不同程度的凝血障碍。目前，血浆冷沉淀在我国主要用作血浆凝血因子Ⅷ储存的原料，也可以用离子交换法进行净化。采用血浆收集、熔化、离心冷却。研究了离子交换层析、病毒灭活和冷冻干燥，主要针对这些方面展开研究。

【关键词】人类;凝血因子Ⅷ;研究;进展

R973?A【DOI】10.12332/j.issn.2095-6525.2021.12.209

前言

凝集素是人體血浆中最重要的蛋白质之一，也是静脉血液循环的重要组成部分。目前，血液中凝血因子Ⅷ水平较低是甲型血友病的指标，根据世卫组织预防血友病的数据可能会有不同的水平，它是凝血因子Ⅷ编码基因突变导致该凝血因子功能缺陷所致的一种凝血功能障碍性遗传病全世界每10000人中有1人发病。随着检测手段的普及，更多的患者被发现，数据显示，尽管凝血因子Ⅷ供应量有所上升，但国内仍存在供不应求的问题。中国一直在进口凝血因子Ⅷ很多年了。造成我国凝血因子短缺的主要原因是生产技术，比如上海生物制品研究所有限公司的FVIII产品就可以生产。考虑到国家政策的影响，有必要开发一条新的血浆生产线。在开发的同时生产研制凝血因子Ⅷ，应加快产品的市场推广，对冷藏和溶出的制备进行了研究。

1?FⅧ的结构与性质

1.1结构

FⅧ主要由肝细胞组成。前体含有2351个氨基酸，这些氨基酸从内网中去除，形成硫键和N-糖基化。一个B场和两个C场在A1、A2和A3之后有较短的酸性区，而f场在A1、A2和A3之后有较短的酸性区Ⅷ序列域是一个高水平的N-糖基化区，与F无关Ⅷ活动，但只能通过身体的加工和分泌;在A2和A3地区，硫化酪蛋白被用作FⅧ的附加因子。大多数FⅧ在b-a3或b区被分成两条独立的链，轻链由a3-c1-c2组成;重链由a1-a2和B区组成。B区的长度随B区的长度而变化。同时，一些金属离子（如Ca′或Mn）可以通过改变蛋白质含量进行配位，FVI与vwF-a3（和C2）结合的关键在于，FVI与vWF的结合覆盖了FVI、vWF-FⅧ和磷酸盐的接触点，以防止F的去除Ⅷ磷脂，防止x-酶复合物的形成，保护fⅧ从激活FXa和活性蛋白C，延长体内半衰期。

1.2活化与失活

FⅧ被激活为FⅧ通过己糖或FXa。凝集酶与重链中的a1-a2和a2-b结合，与轻链N端的Arg1689结合，在这些区域，切断FVI的作用。FXa与血栓形成的机制相同，但也有不同于血栓形成的迹象。FXa与C2的相互作用可能影响重链的分裂，而C2不影响血小板酶的分裂;活化后，FⅧ和vWF重组形成三个组合;活化后，FⅧ与磷脂固定剂和Ca2+相互作用形成酶因子X，两组疏水基团被用于磷酸双层膜，当一系列a-残基相互作用形成盐桥时，FⅧa大大提高了FX的催化效率。FⅧA和FX由盐桥通过静电有源f来控制ⅧA是非常不稳定的，A2区域可以很容易地从这三种组合中分离出来。一些新的重组FⅧ提高了稳定性，一种防止A2解离的方法是在f的半衰期内保留一个小片段Ⅷ在轻链A3中，硫酸和A2之间的共价键可以通过基因突变而增加另一种可能的生命损失是活化蛋白A的水解。APC将A2分为arg562，将A1分为arg336。然而，arg336的分裂改变了A1和A2之间的相互作用，导致因子活性的丧失和高血栓含量Ⅷ保持凝血和抗凝剂的平衡。

2?FVIII的制备

2.1概述

1965年美国开发了一种在封闭无菌系统中从单个血浆生产冷沉淀制剂的方法。但是，冷沉淀制剂的比活性尚不确定，其纯度低，含有血型微粒和抗体，可引起过敏反应。70年代以后，发展了以冷沉淀为原料制备分离纯化的方法，90年代用单克隆抗体亲和层析技术制备了两种高纯度的FⅧ制剂。单抗亲和层析法具有收率高、成本低等优点。FⅧ制剂的纯度不断提高，生产过程中进行严格的病毒活化处理，目前在临床上广泛应用。所有产品均来自人血浆，主要使用离子交换色谱法从人血浆冷冻沉淀液中分离纯化。

2.2离子交换色谱法

以往的沉淀法如聚乙二醇沉淀法和甘氨酸沉淀法生产的FⅧ纯度较低。纤维蛋白原（FG）、纤维连接蛋白（FN）、免疫球蛋白M（IgM）、免疫球蛋白G（IgG）含量较高，FⅧ含量不到总蛋白的1%。先驱采用凝胶色谱法生产高纯度FⅧ制剂，冷冻沉淀液溶解后用氢氧化铝吸附去除维生素K依赖性凝血因子，残渣吸附在柱上。由于其大孔径和弱疏水性，树脂对FⅧ有很强的结合力。该方法可使传统FⅧ制剂的纯度