园艺植物制片技术教学教程.pptVIP

第五章园艺植物制片方法植物制片是进行园艺植物科学研究所需用的一种基本方法，比如进行植物各个器官的解剖构造观察、花芽分化研究、授粉受精观察、贮藏营养观测以及染色体观察等等都需要进行制片。。通过对切片结果的分析，可以比较不同试验处理的效果以及了解不同树种和品种相应的生物特性等。植物制片技术是一个相对独立的体系，内容繁多。本章中我们仅介绍在园艺植物科学研究中常用的一些基本方法和原理。第一节徒手制片一、徒手制片及特点徒手制片（切片）一般指徒手用刀片（常用单面刀片）把新鲜的植物材料切成薄片的制片方法。此法在植物制片中具有十分重要的地位，是一种普遍应用的制片方法。徒手制片的主要优点是：（1）能及时观察研究植物生活组织的结构和天然色彩；（2）方法及用具简单，不需切片机等机械设备，短时间即可完成，这是其他方法所不及的；主要缺点是（3）对于微小、柔软、水分过多以及坚硬的材料，难以用徒手切成薄片；（4）对于操作不熟练者，往往切成厚薄不匀或不完整的切片。二、徒手制片的方法及注意事项徒手制片最主要的工具就是刀片，常可用单面保安刀片。要获得良好的切片，首先要保持刀口的锋利，切片前，先准备好一个培养皿盛好清水，同时准备好显微镜、载玻片、盖玻片、刀片等用具，然后拿取材料进行切片。材料可以是新鲜的材料，也可以是经过固定的材料。切片时，将欲切材料断面和刀片上滴上清水以保持材料湿润。以左手拇指、食指、中指捏住材料，拇指应低于食指，以免切伤手指；材料高出指尖。右手执刀，将刀平放在食指上，刀口朝内，刀面与材料断面平行，然后以均匀快捷的动作自左前方向右后方以臂力带动刀片水平切割移动，不要用腕力。切片时还要注意，切时动作要迅速，材料一次切下，切忌停顿或拉锯式切割。连续切数片后，将切下的薄片轻轻移入盛水的培养皿中备用。然后挑选薄而透明的切片，放在载玻片上的水滴中，加上盖玻片制成临时制片进行观察。用徒手切片的材料不宜过大，一般以表面不超过5-8mm2为宜。对于过于柔软或微小的材料（如叶片、细小的根尖等）需要借助一些夹持物方可进行切片，如果临时制片需保存一段时间，（1）将材料封在水中，每隔20-30分钟再加一滴水，此法可保持数小时；（2）用10%-30%的甘油水溶液代替清水封片，并将制片放在铺有湿滤纸的大培养皿中保存，或用石蜡或指甲油封边保存，可保存1-2周或更长时间。第二节压片及涂片涂片和压片是进行植物染色体观察研究常用的制片方法。其中涂片是将新鲜的材料或者是经过固定的材料于载片上，托涂成均匀一层，经染色后盖上盖玻片镜检。压片是将处理后的材料于载片上分散后加盖片，用拇指或镊子轻轻挤压盖片，使组织分散成一片，然后镜检。???用此法进行染色体观察时注意，若进行染色体数目测定要求取样个体数在5个以上，细胞总数在30个以上；若进行染色体核型分析（组型分析)则要求取样应是来源于不同个体的5个细胞。一、常规压片法???1.取材：与细胞分裂旺盛时期取样，一般植物在上午9-12时，下午2-5时，一般取根尖、茎尖。???2.预处理（前处理）：目的是防止纺锤体的形成，使细胞分裂停止在中期阶段，从而获得较多的中期分裂相，同时预处理还可以使染色体收缩变短，便于观察统计。常用的预处理药剂有：0.05%-0.2%的秋水仙碱溶液、8-羟基喹啉0.002-0.004M、对二氯苯饱和水溶液、富民隆0.01-0.001%。预处理的时间一般为2-12小时。???3.固定：目的是把细胞迅速杀死，是蛋白质变性沉淀，尽量保持材料结构的原有状态。常用的固定液为卡诺固定液，即3：1的纯酒精:冰醋酸溶液。固定时间一般为1-24小时。4.解离：用盐酸处理固定后的材料，使细胞分离，便于压片。一般可用1N的HCl于60摄氏度下15-20分钟或5N的HCl室温下20-25分钟。5.染色：用卡宝-品红或醋酸洋红等核染色剂进行染色。6.压片：将材料移至载玻片上，盖上盖玻片，然后轻轻挤压盖片，使材料成一薄层。7.镜检：将制好的片子于显微镜下进行染色体观察。8.封片：临时封片可用石蜡封边即可。好的片子可进行冷冻干燥，然后用光学树胶封固保存。第三节石蜡制片石蜡制片法是将材料经过固定、脱水、透明、浸蜡后包埋在石蜡里面进行切片的方法，是永久制片法。是光学显微镜的制片技术中最常用的一种方法。