人凝血酶原复合物的临床应用.docx

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人凝血酶原复合物的临床应用

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陈少艾

【摘要】人凝血酶原复合物是从血浆中分离出来的高纯度含有多种促进血液凝固的一种血浆蛋白制剂，主要用于治疗血友病B和维生素K缺乏症或出血症状，仅供静脉输注，含有凝血因子II（Prothrombin）、凝血因子VII（Proconvertin）、凝血因子IX（Christmasfactor）和凝血因子X（Stuart-Prowerfactor）。凝血因子IX被认为是本品治疗作用的主要因素。随着PCC分离技术的发展和安全性的提高，PCC的应用也在逐年增加，PCC的研究现状、临床应用和安全性也在不断提高。

【关键词】人凝血酶原复合物;制备方法;临床应用

R457.1?A【DOI】10.12332/j.issn.2095-6525.2021.12.172

前言

凝血因子II、凝血因子VII、凝血因子IX和凝血因子X，这是一组依赖维生素K在肝脏合成的凝血因子，属糖蛋白，这些蛋白质因子在其翻译后加工过程中，其N端的一些谷氨酸残基需进行由羧基化酶催化的加γ羧基化反应，而维生素K是此酶促反应必不可缺的辅助因子因而也称为“维生素K依赖因子”。γ羧基化反应使得这些蛋白分子中均含有γ羧基谷氨酸（Gla），Gla是可以与钙离子结合的氨基酸，它的存在使依赖维生素K凝血因子具有与金属离子结合的性质。依赖维生素K凝血因子与钙离子结合后发生构象改变，从而显露出与磷脂膜结合的特征，并进而参与血液凝固过程。这些凝血因子有相似的理化性质，具有相似的分子量、等电点、电泳迁移率等。因此，在大规模生产中很难用一般的物理方法将它们分开。这四种血小板因子几乎都是包括PCC在内的，在临床上广泛应用于治疗血友病B和Ⅱ型出血所致的出凝血疾病。它还可以治疗产生抑制物的A型血友病和肝病患者凝血因子和抗凝蛋白减少可引起的出凝血，可用于治疗肝病患者出血症状，由于高水平的肝炎，PCC被广泛用于肝出血患者。从临床实践来看，PCC的摄入量逐年增加。

1?PCC分离纯化

PCC的原料是新鲜冰冻血浆、解冻血浆和低温乙醇，PCC的关键是防止血栓的活化。为什么質量比乙醇高，导致一些天然血浆抑制剂的流失和血小板因子的活化。近年来，PCC的分离纯化主要以吸附法为主，随着现代生物分离纯化技术的发展，出现了新的分离技术，如仿射色谱法和膨胀床吸附法（EBA），其中最成功的是膨胀床吸附法。

1.1无机盐的吸附

制备PCC的第一种方法是用无机盐吸附剂吸附血浆，用硫酸钡吸附血浆制备血栓形成复合物，然后用无毒磷酸盐吸附钙，洗涤柠檬酸钠（PCS）。该方法的缺点是与低温乙醇结合使用困难，血浆浓度很低，磷酸钙被吸收，不产生其他血浆蛋白;另外，血浆采集后加入柠檬酸钠作为抗凝剂，但柠檬酸和钙离子会影响其吸附。目前，我国仍有植物在磷酸三钙吸附储备中PCC的FVA含量高于FIX。

1.2离子交换吸附

目前采集的血浆主要是柠檬酸的抗凝剂，柠檬酸与无机盐的吸附剂发生反应，因此，用柠檬酸作为PCC分离的原料时，对维生素K依赖因子的吸附受到抑制，通常用离子交换器进行吸附。

PCS中的四种凝血因子，Deae-sephadexa-50仍然是制备PCC的主要方法，根据此方法，将Deae-sephadexa-50加入到血浆中，搅拌一段时间进行吸附，然后离心分离离子交换树脂，转移到色谱柱。洗涤和洗涤同时，吸附血浆可用于低温乙醇下分离其他血浆蛋白。由于离子交换树脂进入血浆进行吸附，称为间歇吸附，含量与生产过程密切相关，最终产品中含有致凝血因子V，转化为四因子浓缩物，用DEAE纤维素等弱离子交换树脂将不含凝血因子V的产物转化为三因子浓缩物。

与无机盐的吸附不同，间歇式吸附系统的最大优点是可以与低温乙醇技术相结合，从血浆和其他有用物质如蛋白质、IGG、FVIII等制备PCC间歇吸附必须在混合料斗中进行吸附，由于凝胶的机械强度较低，容易破碎。洗涤应在色谱柱上进行，易造成交叉污染，周期长;等离子治疗是有限的，采用半精密法制备PCC。用搅拌器将血浆和凝胶放入一个圆柱形容器中，同时吸附的血浆以一定的速度进入容器底部，也就是说，整个血浆无需凝胶即可清洗。与间歇吸附相比，半射流吸附不受容器容积的限制，易于过程控制，具有较高的永久活性回收率，很少使用生产设施。

1.3膨胀层吸附

周期吸附法的缺点是自动化程度低、易交叉污染、分步生长、运行成本高;所用的吸附剂易被破坏，再利用时会出现一系列问题，采用新型膨胀床分离技术可以解决这一问题。使用碳化钨（DEAE）作为介质吸附床上的血浆。整个过程耗时4.8小时，最终的PCC不含FVI。FII、fix和FX分别占71%、48%和80%。

2?PCC的临床应用

2.1血友病B的治疗

乙型血友病是一种X染色体连锁的隐性遗传性出血性疾病，因编码因子IX基因