单菌落挑选指南课件.pptVIP

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菌落的挑操作注意事1.培养皿底部向上,在酒精灯火焰20cm内操作。2.操作不要,在无操作。3.挑斑器具要求无菌。4.挑离群菌落的菌落,菌落不要大。5.白斑(原理),挑取大小合适的白斑。

野生型大杆菌生的β-半乳糖苷可以将无色化合物X-gal(5-溴-4--3--β-D-半乳糖苷)切割成半乳糖和深色的物5-溴-4-靛。适用于白斑的基因β-半乳糖苷缺陷型菌株。种宿主菌的染色体基因中β-半乳糖苷的基因突,造成的β-半乳糖苷失去正常N段一个146个氨基酸的短(即α),从而不具有生物活性,即无法作用于X-gal生色物。当菌体中含有lacz的粒后,粒lacz基因α和菌株基因表达的N端缺的β-半乳糖苷突体互,具有与完β-半乳糖苷相同的作用X-gal生成色物的能力,种α-互。操作中,添IPTG(异丙基硫代-β-D-半乳糖苷)以激活lacz中的β-半乳糖苷的启子,在含有X-gal的固体平板培养基中菌落呈

中,通常白是与抗性一同使用的。含X-gal的平板培养基中同含有一种或多种体所携抗性相的抗生素,,一次可以判断化的菌不具有抗性,不生;化了空体,即未重粒的菌,成色菌落;化了重粒的菌,即目的重菌,成白色菌落。

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