盐酸小檗碱片设备清洁残留量测定方法的研究.docx

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盐酸小檗碱片设备清洁残留量测定方法的研究

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摘要目的：建立盐酸小檗碱片设备清洁化学残留量的测定方法。

方法：色谱柱岛津WondsilC185μm(250×4.6mm)；以磷酸盐缓冲液[0.05mol/L磷酸二氢钾溶液和0.05mol/L庚烷磺酸钠（1:1），含0.2%三乙胺，并用磷酸调节pH值至3.0]-乙腈（60:40)为流动相，检测波长为263nm，柱温为30℃，流速为1ml/min。结果：盐酸小檗碱在0.1048μg/ml～14.0417μg/ml范围内线性关系良好，回归方程为y=46.553x-1.6856（r=0.9999）；钢板回收率为75%，RSD为5%。结论：用高效液相色谱法测定盐酸小檗碱片设备清洁残留量，方法简便准确，结果准确，重现性好，可用于盐酸小檗碱片设备清洁验证中化学残留的检测。

关键词高效液相色谱法盐酸小檗碱盐酸小檗碱片清洁验证

1.仪器与试药

高效液相色谱仪Agilent1100；色谱柱：WondsilC185μm(250×4.6mm)；盐酸小檗碱对照品，批号：110713-201613，由中国食品药品检定研究院提供；所用乙腈为色谱纯，其它试剂为分析纯；供试品为盐酸小檗碱片。

2.方法与结果

2.1.色谱条件以十八烷基硅烷键和硅胶为填充剂，以磷酸盐缓冲液[0.05mol/L磷酸二氢钾溶液和0.05mol/L庚烷磺酸钠（1:1），含0.2%三乙胺，并用磷酸调节pH值至3.0]-乙腈（60:40)为流动相，检测波长为263nm，柱温为30℃，流速为1ml/min，进样量为10ul。

2.2.溶液制备

供试品溶液的制备：取盐酸小檗碱片,研细，精密称取适量，置100ml容量瓶中，加甲醇适量，超声处理10分钟使溶解，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，即得供试品储备液。

精密吸取供试品储备液2.00mL，置25mL容量瓶中,加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。

对照品储备溶液的制备：精密称取盐酸小檗碱对照品2.311mg，置50ml容量瓶中，加甲醇适量使溶解，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得0.040119mg/ml对照品储备液。

精密吸取对照品储备液，精密量取3.50ml于25ml容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，即得0.0056167mg/ml对照品溶液。

2.3检出限和定量限：精密量取浓度为0.056167μg/mL的对照品溶液10μl注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件进行进样，测得信噪比为5.8:1，信噪比大于3:1，说明仪器的最低检出限为0g（相当于0.006ug/cm2）。精密量取该溶液20μl注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件进行进样，测得信噪比为15.2:1，信噪比大于10:1，说明仪器的定量限为0.0011233ug（相当于0.012ug/cm2）。

2.4.专属性:

空白溶液：取用于擦拭法的棉签4支，用75%乙醇溶液润湿，置于50ml具塞锥形瓶中（必须为洁净），精密加入甲醇10ml，超声处理10分钟，即得。分别取空白溶液、溶剂(甲醇)、对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。

2.5.线性关系考察

精密吸取对照品储备液0.25mL、0.50mL、1.00mL、3.50mL、2.00mL、2.50mL、3.00mL分别至10mL、10mL、10mL、25mL、10mL、10mL、10mL容量瓶内，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得标准曲线对照品系列溶液。分别取10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，结果表明盐酸小檗碱在0.1048μg/ml～14.0417μg/ml范围内线性关系良好，回归方程为y=46.553x-1.6856（r=0.9999）。

2.6.精密度试验

分别精密吸取浓度为0.0056167mg/ml的盐酸小檗碱对照品溶液10μl，按测定方法重复进样6次，峰面积分别为254.9、259.1、256.2、256.5、259.2、259.6，峰面积的相对标准偏差RSD%为0.76%，未超过2%，说明仪器精密度良好。

2.7.稳定性

分别吸取第0h、6h、12h、36h、72h供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，峰面积相对标准偏差RSD%为4.6%，满足要求。

2.8.准确度

取供试品溶液9份，分别按照50%、100%、150%浓度添加对照品溶液，每个浓度3份，分别吸取溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。

试验结果表明回收率以盐酸小檗碱回收率计，平均回收率为99.5%，加样回收率的相对标准偏差RSD为5%，说明方法准确度满足要求。

2.9.取样方法和取样回收率：照棉签擦拭法取样

供试品溶液制备：分别精密吸取供试品储备溶液0.25ml、0.50ml、0.75ml各3份。

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