生化实验三 酶的底物专一性.pptVIP

实验三目的了解酶的专一性掌握检查酶专一性的原理和方法学会排除干扰因素，设计酶学实验实验内容本实验以唾液淀粉酶（内含淀粉酶及少量麦芽糖酶）、蔗糖酶对淀粉及蔗糖的催化作用，观察淀粉酶、蔗糖酶的底物专一性。原理酶的专一性是指一种酶只能对一种底物或一类底物起催化作用，对其他底物无催化作用。酶的专一性程度分为：键专一性：只要求作用于一定类型的键，对键两端基团无严格要求。如脂酶、核酶基团专一性：只对键两端一个基团要求严格，如α-、β-葡萄糖苷酶，转移酶绝对专一性：只作用于一种底物，如某些核酸工具酶立体异构专一性：旋光异构专一性和几何异构专一性酶的专一性淀粉直链淀粉:由200-300个α-葡萄糖以α-1，4糖苷键相连成一直链支链淀粉:有α-1，4糖苷键和α-1，6糖苷键，在直链淀粉的基础上形成分支直链淀粉的相对分子质量比支链淀粉小，直链淀粉的分子是由许多α-D-葡萄糖经过α-1，4-苷键反复连接而成的线状聚合物。直链淀粉直链淀粉的形状并不是伸展状态的直链，而是有规律的卷曲成螺旋状，每一螺旋圈约有6个葡萄糖结构单位。直链淀粉遇碘液显蓝色，加热煮沸时颜色消失，冷却后又重新显色。这个反应很灵敏，常用来检验淀粉或碘的存在。支链淀粉比直链淀粉由更多的D-葡萄糖组成，其连接方式也有所不同。支链淀粉中D-葡萄糖之间以α-1，4苷键连接成主链，每隔20－25个葡萄糖单位便分枝出1个支链，支链上还有分枝，而支链的连接点即分枝处为α-l，6糖苷键。支链淀粉支链淀粉分枝状结构由α-葡萄糖和β-果糖以α-1，2糖苷键相连而成的双糖蔗糖Benedict反应Benedict试剂是碱性硫酸铜溶液，具有一定的氧化能力，能与还原性糖的半缩醛羟基发生氧化还原反应，生成氧化亚铜（Cu2O）砖红色沉淀。淀粉和蔗糖都不能反应，而它们的水解产物葡萄糖能够发生Benedict反应，所以，用颜色反应来观察淀粉酶、蔗糖酶对淀粉及蔗糖的水解作用。半缩醛羟基在右边，即与氧环同侧——α-D-葡萄糖；半缩醛羟基在左边，即与氧环异侧——β-D-葡萄糖。试剂淀粉酶溶液：唾液2mL倒入10mL量筒中（不包括泡沫），用蒸馏水稀释到5mL，静置10分钟后，去掉上层泡沫和下层的沉淀。（自制）蔗糖酶溶液：干酵母1g置研钵中，加半勺石英沙及蒸馏水少许（约4mL），用力研磨10分钟，转移到50mL离心管中，另用25mL蒸馏水洗涤研钵，并将洗涤液一起转移到离心管中，摇匀，静置5分钟，离心(离心前对称放置的两只离心管要等重配平，精确到0.01g)，小心取出上清液（含蔗糖酶）备用。（自制）0.5%淀粉溶液（含0.3%NaCl）（取前摇匀）2%蔗糖溶液Benedict试剂Benedict试剂在600mL蒸馏水中溶解173g柠檬酸钠和100g无水碳酸钠，冷却后稀释到850mL。在100mL热蒸馏水中溶解17.4g无水硫酸铜。冷却后稀释到150mL。把硫酸铜溶液缓缓倒入柠檬酸钠－碳酸钠溶液中，边加边搅拌，如产生沉淀。要过滤，班氏试剂配制后能长期使用。如存放较久而产生沉淀时，可取上层清液使用，不必重配。