生化实验一 酶的底物专一性.pptVIP

生物化学技术60学时

（生物技术、应用生物技术、生物科学）实验内容（40学时）

（生物工程、生物信息、张之洞班）1.酶的底物专一性（4）2.总糖和还原糖的测定（4）2.蛋白质N端分析（4）4.植物DNA的提取（4）5.DNA的酶切和电泳（4）6.酵母醇脱氢酶的提取和纯化（12）7.SDS测定蛋白质分子量（8）实验内容（60学时）

（生物技术、应用生物技术、生物科学）酶的底物专一性（4）总糖和还原糖的测定（4）蛋白质N端分析（4）植物DNA的提取（4）DNA的酶切和电泳（4）酵母醇脱氢酶的提取和纯化（12）亲和层析分离纯化蛋白质（14）WesternBlot鉴定目的蛋白（14）实验要求按时上课，不得缺席预习实验内容认真观察实验现象，如实记录实验数据独立分析实验结果，按时完成实验报告实验室守则★保持室内安静、整洁★严格按操作规程使用仪器设备，节约试剂和实验材料★实验过程中注意水、电、门窗安全★实验完毕后，将仪器、器皿放归原处★做好实验室卫生特别注意★若发生仪器故障其它事故，应立即切断相关电源，及时报告老师★违反操作规程造成事故、仪器损坏，将按学校有关规定赔偿★每位学生一套基本的实验物品，放置在抽屉中，对照有物品清单，每次做完实验后，清点无误后归回抽屉；每次实验另外发放的实验物品，用完清洗后放置在实验台面上。★每次做完实验后，由班长安排4名同学做清洁卫生，做完后必须由实验老师检查通过。实验报告●每人1份，下次实验课前交。生物化学实验成绩★出勤和实验室综合表现15分★实验报告35分★实验课考试50分酶的底物专一性实验一目的了解酶的专一性掌握检查酶专一性的原理和方法学会排除干扰因素，设计酶学实验实验内容本实验以唾液淀粉酶（内含淀粉酶及少量麦芽糖酶）、蔗糖酶对淀粉及蔗糖的催化作用，观察淀粉酶、蔗糖酶的底物专一性。原理酶的专一性是指一种酶只能对一种底物或一类底物起催化作用，对其他底物无催化作用。酶的专一性程度分为：键专一性：只要求作用于一定类型的键，对键两端基团无严格要求。如脂酶、核酶基团专一性：只对键两端一个基团要求严格，如α-、β-葡萄糖苷酶，转移酶绝对专一性：只作用于一种底物，如某些核酸工具酶立体异构专一性：旋光异构专一性和几何异构专一性酶的专一性淀粉直链淀粉:由200-300个α-葡萄糖以α-1，4糖苷键相连成一直链支链淀粉:有α-1，4糖苷键和α-1，6糖苷键，在直链淀粉的基础上形成分支直链淀粉的相对分子质量比支链淀粉小，直链淀粉的分子是由许多α-D-葡萄糖经过α-1，4-苷键反复连接而成的线状聚合物。直链淀粉直链淀粉的形状并不是伸展状态的直链，而是有规律的卷曲成螺旋状，每一螺旋圈约有6个葡萄糖结构单位。直链淀粉遇碘液显蓝色，加热煮沸时颜色消失，冷却后又重新显色。这个反应很灵敏，常用来检验淀粉或碘的存在。支链淀粉比直链淀粉由更多的D-葡萄糖组成，其连接方式也有所不同。支链淀粉中D-葡萄糖之间以α-1，4苷键连接成主链，每隔20－25个葡萄糖单位便分枝出1个支链，支链上还有分枝，而支链的连接点即分枝处为α-l，6糖苷键。支链淀粉支链淀粉分枝状结构由α-葡萄糖和β-果糖以α-1，2糖苷键相连而成的双糖蔗糖Benedict反应Benedict试剂是碱性硫酸铜溶液，具有一定的氧化能力，能与还原性糖的半缩醛羟基发生氧化还原反应，生成氧化亚铜（Cu2O）砖红色沉淀。淀粉和蔗糖都不能反应，而它们的水解产物葡萄糖能够发生Benedict反应，所以，用颜色反应来观察淀粉酶、蔗糖酶对淀粉及蔗糖的水解作用。半缩醛羟基在右边，即与氧环同侧——α-D-葡萄糖；半缩醛羟基在左边，即与氧环异侧——β-D-葡萄糖。