动物细胞融合和单克隆抗体用课件.pptVIP

2010-3-261

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植物体细胞杂交植物细胞A去细胞壁植物细胞B纤维素酶、果胶酶原生质体A原生质体B诱导物理法化学法原生质体融合杂种细胞杂种植株组织培养2010-3-263

一、动物细胞融合1.概念：动物细胞融合（cellfusion)，又称体细胞杂交（somatichybridiazation），是指两个或更多个相同或不同细胞结合形成一个细胞的过程。融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞，称为杂交细胞。2010-3-264

2、动物细胞融合基本原理：与植物原生质体融合的基本原理相同，即细胞膜的流动性3、诱导方式物理法：电激、振动、离心化学法：聚乙二醇（PEG）生物法：灭活的病毒例如：仙台病毒2010-3-265

生物法：灭活的病毒（丧失感染性、保留抗原结构）灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面细胞膜被病毒颗粒穿通细胞膜连接细胞融合，形成杂种细胞（细胞膜具有一定的流动性）2010-3-266

病毒促使细胞融合的主要步骤如下：1.两个原生质体或细胞在病毒黏结作用下彼此靠近；2.通过病毒与原生质体或细胞膜的作用使两个细胞膜间互相渗透，3.胞质互相渗透；4.两个原生质体的细胞核互相融合，两个细胞融为一体；5.进入正常的细胞分裂途径，分裂成含有两种染色体的杂种细胞。2010-3-267

4、过程：动物细胞A动物细胞B诱导方法诱导，融合（膜融合、质融合、核融合）单核细胞有丝分裂2个完整的杂交细胞AB2010-3-268

5、动物细胞融合技术的发展简史告诉我们：科学技术是不断发展的。那么，实现动物细胞融合有什么意义呢？?打破生殖隔离，使远缘杂交成为可能；?广泛应用多个学科领域；?重要用途：制备单克隆抗体。2010-3-269

6、植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较比较项目植物体细胞杂交动物细胞融合细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞的全能性细胞融合原理去除细胞壁后诱导使细胞分散后诱导原生质体融合细胞融合细胞融合的方法诱导方法物理（离心、振荡、物理、化学方法（电刺激）化学（聚乙二醇）同左）灭活的病毒用途获得杂种植株制备单克隆抗体2010-3-2610

二、单克隆抗体回顾1、什么是克隆？“克隆”从英文“clone”音译而来，是指从一个共同祖先，通过无性繁殖的方法产生出来的一群遗传特性相同的DNA分子，细胞或个体。在细胞水平指动物细胞培养.2、什么是抗体？抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。3、抗体的分布？主要分布在血清中。2010-3-2611

1、单克隆抗体概念:由单个B淋巴细胞经过无性繁殖（克隆）形成基因型相同的细胞群，这一细胞群所产生的化学性质单一、特异性强的抗体。2010-3-2612

?自主阅读P52：抗体的传统生产方法及缺陷是什么？该法制备抗体的特点：产量低、纯度低，且抗体的特异性差、灵敏度低。思考：如何大量获取某种特定抗体？2010-3-2613

B淋巴细胞特点：１.B淋巴细胞受抗原刺激后，可以产生抗体。２.动物体内的B淋巴细胞可以产生百万种以上的抗体，每种抗体对特定的抗原具有特异性免疫作用。３.每一个B淋巴细胞只能产生一种抗体。2010-3-2614

怎样才能大量生产单克隆抗体？提示1：仅用细胞培养技术可行吗？提示2：我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的？提示3：有什么方法能使B细胞产生抗体的能力和肿瘤细胞无限增殖能力同时具备呢？2010-3-2615

2、单克隆抗体的制备过程自学与思考：1）在从小鼠体内取B淋巴细胞前应对小鼠作何种处理？为什么要这样处理？2）从小鼠何处获取B淋巴细胞？3）如只考虑两两融合，可能出现哪些融合类型细胞？4）是否所有杂交瘤细胞都能产生某一特定抗体？5）由特定的B淋巴细胞和小鼠骨髓瘤细胞融合成的杂交瘤细胞具有什么特点？6）最后可以通过哪些途径大量获取抗体？2010-3-2616

注射特定抗原蛋白培养骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞（只考虑两两融合）B淋巴细胞培养液中细胞有几种类型？融合细胞几种类型？融合骨髓瘤细胞---骨髓瘤细胞多种杂交细胞B淋巴细胞---B淋巴细胞第1次筛选目的：得到杂该细胞继承双亲细胞在具有筛选作用的培养基上培养B淋巴细胞---骨髓瘤细胞交瘤细胞（多种）。杂交瘤细胞有何特点？专一抗体检验阳性的遗传特性，既能产生专克隆一上述杂交抗体细胞又能无限增殖。分开不同杂交细胞，克隆专一抗体，瘤细胞中筛选出能产生所检验阳性细胞第2次筛选目的：在杂交需抗体的杂交瘤细胞。体外培养注射到小鼠体内特异性强，灵敏度高2010-3-26单克隆抗体17

比较项目第一次筛选第二次筛选原理在选择性培养基中添抗原—抗体的加某种药物，未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡，只有融合的杂种细胞才能生长特异性结合既能无限增殖，又能产生特异性抗