专题DNA和蛋白质技术专家讲座.pptVIP

专题五DNA和蛋白质技术

课题1DNA粗提取与判定

课题2多聚酶链式反应扩增DNA片断

课题3血红蛋白提取和分离专题DNA和蛋白质技术专家讲座第1页

课题1DNA粗提取与判定

专题DNA和蛋白质技术专家讲座第2页

一、提取DNA方法1.提取生物大分子基本思绪（1）选取一定________或________方法分离含有不一样物理或化学性质生物大分子。（2）DNA粗提取就是利用DNA与______、______和________等在物理或化学性质方面差异，提取DNA，去除其它成份。物理化学RNA蛋白质脂质专题DNA和蛋白质技术专家讲座第3页

（1）利用DNA溶解性? DNA溶解度2.提取DNA分子基本原理专题DNA和蛋白质技术专家讲座第4页

? DNA不_______酒精溶液,不过细胞中一些蛋白质则_______酒精。利用这一原理,可将DNA与蛋白质深入分离。溶于溶于专题DNA和蛋白质技术专家讲座第5页

①蛋白酶能水解蛋白质,但对________没有影响。②大多数蛋白质不能忍受____________高温,而DNA在80℃以上才会变性。③洗涤剂能够瓦解__________,但对________没有影响。温度洗涤剂DNA60-80℃细胞膜DNA（2）利用DNA和蛋白质对酶、_______和________耐受性不一样专题DNA和蛋白质技术专家讲座第6页

（3）DNA判定:DNA在沸水浴条件下，遇________反应会展现________二苯胺蓝色专题DNA和蛋白质技术专家讲座第7页

二、DNA粗提取与判定试验设计（一）试验材料选取材料:新鲜鸡血注意:本试验中，要往鸡血中加入抗凝剂（柠檬酸钠溶液）标准上只要含DNA生物材料都能够,不过选取DNA含量相对较高生物组织,成功率更大。专题DNA和蛋白质技术专家讲座第8页

(1)先将新鲜鸡血离心,取得鸡血细胞(2)在鸡血细胞中加入一定量蒸馏水,同时用玻璃棒搅拌,过滤后搜集滤液即可（二）破碎细胞,获取含DNA滤液1.破碎细胞讨论：为何加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？利用了什么原理？2.过滤，获取含DNA滤液专题DNA和蛋白质技术专家讲座第9页

（三）去除滤液中杂质讨论:为何重复地溶解与析出DNA，能够去除杂质答:用高盐浓度溶液溶解DNA，能除去在高盐中不能溶解杂质；用低盐浓度使DNA析出，能除去溶解在低盐溶液中杂质。所以，经过重复溶解与析出DNA，就能够除去与DNA溶解度不一样各种杂质专题DNA和蛋白质技术专家讲座第10页

讨论：方案二与方案三原理有什么不一样？方案二是利用蛋白酶分解杂质蛋白,从而使提取DNA与蛋白质分开；方案三利用是DNA和蛋白质对高温耐受性不一样,从而使蛋白质变性,与DNA分离方案二利用了酶专一性；方案三利用了DNA稳定性。专题DNA和蛋白质技术专家讲座第11页

（四）DNA析出与判定DNA析出用是与滤液体积相等冷却酒精溶液（体积分数为95％）,静置2-3min,溶液中会出现白色丝状物,这就是粗提取DNA。用玻璃棒沿一个方向搅拌,卷起丝状物,并用滤纸吸收上面水1.DNA析出专题DNA和蛋白质技术专家讲座第12页

A:2mol/LNaCl溶液5ml+DNA丝状物+二苯胺试剂4mlB:2mol/LNaCl溶液5ml+二苯胺试剂4ml混合均匀后,将试管置于沸水中加热5min,待试管冷却后,比较两只试管中溶液颜色改变,看看溶解有DNA溶液是否有蓝色2.DNA判定专题DNA和蛋白质技术专家讲座第13页

以鸡血为试验材料进行DNA粗提取②鸡血细胞极易吸水胀破,而用动物肝脏细胞作试验材料经常需要匀浆和离心,对设备要求较高,操作繁琐,历时较长1.鸡血细胞做试验材料原因①鸡血细胞核DNA含量丰富,材料易得专题DNA和蛋白质技术专家讲座第14页

2.试验原理①DNA在NaCl溶液中溶解度,是伴随NaCl浓度改变而改变。当NaCl物质量浓度为0.14mol／L时,DNA溶解度最低。利用这一原理,能够使溶解在NaCl溶液中DNA析出。②DNA不溶于酒精溶液,不过细胞中一些蛋白质能够溶于酒精溶液。利用这一原理,能够深入提取出含杂质较少DNA。③DNA遇二苯胺（沸水浴）会染成蓝色,所以,二苯胺能够作为判定DNA试剂。专题DNA和蛋白质技术专家讲座第15页

试验材料和用具试验材料：1、鸡血细胞液（5~10ml）；2、体积分数为95%冷酒精溶液（试验前置于冰箱内冷却24h）；3、蒸