超声波辅助法提取凤尾草中黄酮类化合物的影响因素研究.docxVIP

?

?

超声波辅助法提取凤尾草中黄酮类化合物的影响因素研究

?

?

超声波辅助法提取凤尾草中黄酮类化合物的影响因素研究

摘要：采用超声波辅助法提取了凤尾草中的黄酮类化合物，研究了影响凤尾草黄酮类化合物提取的多种因素。试验结果表明，在提取温度为４０℃，提取时间为４０ｍｉｎ且用60%（体积分数，下同）甲醇作为提取剂时提取率最高。

关键词：凤尾草；黄酮类化合物；影响因素

凤尾草，又称鸡爪草，属凤尾蕨科的小型陆生蕨，叶二型；不育叶为一回羽状复叶，羽片条形，上部羽片基部下延，在中轴两侧形成狭翅，下部羽片常有二至三叉，形似凤尾，故而得名［１］。凤尾草中全草含黄酮类、甾醇、氨基酸、内酯或酯类等生理活性成分，全草都可以供药用，它具有清热利湿、凉血解毒、强筋活络等功效［２］，能增强免疫力、延缓衰老等，无论在临床应用还是保健类食品开发方面都有广阔的开发前景。因此对凤尾草的研究和开发成为国内外目前的研究热点之一［３－５］。本试验从凤尾草黄酮类化合物提取影响因素方面进行了研究，为凤尾草的深入研究和天然药物的开发提供了一定的理论依据。

１材料与方法

１．１材料

凤尾草：采摘于江苏省宿迁学院院内墙角下。

１．２主要试剂和仪器

0.01mol/L盐酸、60%甲醇、60%（体积分数，下同）乙醇、60%（体积分数，下同）丙酮，均为分析纯，纯品由国药集团化学试剂有限公司（上海）生产；芦丁标准品，由中国药品生物制品检定所提供。

ＵＶ－２１０２Ｃ型紫外－可见分光光度计［尤尼柯（上海）仪器有限公司］；ＦＡ２００４Ｎ电子分析天平（上海精密科学仪器有限公司）；ＫＱ－２５０Ｂ型超声波清洗器；温控水浴锅；大孔吸附树脂。

１．３方法

１．３．１黄酮类化合物的提取称取１０.00ｇ凤尾草样品，研磨破碎后，用60%甲醇按１∶１０（ｍ／Ｖ，ｇ∶ｍＬ）的比例混合均匀，于４０℃下提取60min后，在４０℃的水浴中超声波辅助提取３次，每次１０ｍｉｎ，抽滤。收集到的滤液于４０℃下减压浓缩得到红色黏稠的粗提液，经树脂纯化、洗脱后，再次进行减压浓缩即得到黄酮类化合物浓缩液［６］，将浓缩液用0.01mol/L盐酸和６０％甲醇配成ｐＨ值为３．０的备用液，摇匀供分析试验用。

１．３．２黄酮类化合物含量的测定芦丁标准储备液：称取０．０１００ｇ芦丁标准品，置于５０ｍＬ的容量瓶中，加0.01mol/L盐酸和６０％甲醇使其溶解［7，8］，调节ｐＨ值为３．０并稀释至刻度，摇匀备用。分别移取１．０、１．５、２．０、２．５、３．０、３．５ｍＬ的芦丁标准储备液，于１０ｍＬ容量瓶中，定容。在波长５２０ｎｍ处分别测定其吸光度，结果见图１。准确吸取待测凤尾草的提取液２．０ｍＬ定容至５０ｍＬ。在波长５２０ｎｍ处测其吸光度。由标准曲线回归方程计算出凤尾草中黄酮类化合物的浓度，根据稀释倍数计算出凤尾草中黄酮类化合物的总含量［9，10］。

２结果与分析

２．１凤尾草黄酮类化合物的光谱特性

由吸收光谱图２可知，凤尾草黄酮类化合物在４００～７００ｎｍ之间有一最大吸收峰，该最大吸收峰峰值出现在５２０ｎｍ处。由于凤尾草黄酮类化合物对酸度很敏感，不同酸度会导致其最大吸收峰的移动［１1］，因此以下各试验要在相同的条件下，选择其对应的最大吸收峰进行测定。

２．２提取剂对凤尾草黄酮类化合物提取率的影响

称取３份５．００ｇ的凤尾草样品，分别以60%甲醇、60%乙醇、60%丙酮为提取剂定容至５０ｍＬ，其中加入0.01mol/L盐酸调节ｐＨ值为３．０。按上述凤尾草提取剂的制取方法提取凤尾草液。各取０．１ｍＬ测其吸光度，计算提取率。不同提取剂对凤尾草黄酮类化合物提取率的影响见表１。表１表明，采用60%甲醇作为提取剂，其提取效果均与60%乙醇、60%丙酮作为提取剂差异显著，采用甲醇为提取剂提取率最高。因此，选择60%甲醇作为提取剂。

２．３提取温度对凤尾草黄酮类化合物提取率的影响

称取６份５．００ｇ样品研磨后，分别以60%甲醇为溶剂定容至５０ｍＬ，其中加入0.01mol/L盐酸调节ｐＨ值为３．０，于４０℃下提取60min后，再分别在２０、３０、４０、５０、６０、７０℃水浴中超声波辅助提取3次，每次１０ｍｉｎ，合并滤液，得凤尾草提取液。测定并计算提取率。不同提取温度对凤尾草黄酮类化合物提取率的影响见图３。由图３可见，黄酮类化合物的提取率随提取温度的升高总体呈下降趋势，但以提取温度为４０℃时最高。另在试验中观察到，当提取温度分别为５０℃和６０℃时，凤尾草提取液中出现白色絮状沉淀，且甲醇的沸点为６４～６５℃，在提取温度为６０℃时甲醇会大量挥发。分析结果表明，２０、３０、４０℃处理间差异不显著，而５０、６０℃处理与２０、３０