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结核感染T细胞γ—干扰素释放试验在结核病诊断中的应用价值
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摘要目的：探讨结核感染T细胞试验（TB-IGRA）在结核病诊断中的应用价值。方法：选取2018年9月到2018年11月期间于我院住院且进行TB-IGRA检测的共232例患者的临床资料，结合这些患者的病史、临床表现、影像学资料，以及其临床诊断，将这些患者分成结核病组(98例)和非结核病组（134例），结核病组分为肺结核和肺外结核组，分别检测其γ-干扰素释放水平。结果：结核病组γ-干扰素释放的阳性率（88.78%）明显高于非结核病组的（29.85%），差异有统计学意义（χ2=79.327，P0.05）；肺结核病组的阳性率（89.02%）与肺外结核病组（87.5%）的Fisher精确值为1.000，P0.05，差异无统计学意义。结论：TB-IGRA对肺结核和肺外结核病都具有较高的诊断价值，可作为结核病的实验室辅助诊断之一。
关键词：γ—干扰素，T细胞，结核病
据世界卫生组织报道，结核病仍然是严重威胁着人类生命健康的慢性传染病，它的发病率也居高不下。据统计，2016年全球约1040万例结核病患者，170万例因结核病病死，估计有100万例儿童感染结核病，其中25万例病死[1]。目前结核病的临床诊断主要依靠细菌学涂片和痰培养检查。但涂片特异性不高，敏感性不佳;痰培养时间长，阳性率仅为30%或更低。分子生物学技术又因设备昂贵、对实验操作要求高等一系列原因，容易出现假阳性和假阴性结果。免疫学检查操作简单，对仪器设备要求也较低，其中结核感染T细胞实验有着一系列的优点逐渐较多地应用于临床诊断。多年来国内外学者一直在探索快速、简便、敏感的实验室方法来诊断结核病。结核分枝杆菌γ‐干扰素（IFN‐γ）体外释放（TB‐IGRA）定量试验作为一种诊断方法在国外已得到广泛应用[2-4]。近年来，以T细胞检测为基础的试验(TB-IGRA)成为比较流行的免疫学诊断方法之一。并逐渐的到大家的认可。
TB-IGRA试验是将含有结核菌的特异性抗原加入受试者的血液标本或者含有分离出的外周血单核细胞的培养基中进行孵化，如果受试者之前感染过结核分枝杆菌，当再次暴露于这些抗原面前会激活体内的记忆T细胞对这些抗原做出反应，然后细胞增殖、分化并释放大量的干扰素和细胞因子，通过ELISA/ELISPOT方法定量检测γ－干扰素的释放水平[5]。
1.材料与方法
1.1研究对象
选择2018年9月到2018年11月期间于我院住院的共232例病人结合这些患者的病史、临床表现、影像学资料，以及其临床诊断，将这些患者分成结核病组(98例)和非结核病组（134例），结核病组分为肺结核和肺外结核组，分别检测其γ-干扰素释放水平。
1.2方法
1.2.1标本采集
用绿色肝素锂抗凝真空采血管通过患者肘静脉采集血液，体积不低于4ml的新鲜全血标本，
1.2.2试剂
购买的北京万泰生物药业股份有限公司的结核感染T细胞试剂盒。
1.2.3仪器
酶标仪：雷杜的型号为RT-6100的酶标分析仪，37℃恒温箱，离心机，洗板机：深圳市盛信康科技有限公司的产品,型号为SK961的自动酶标洗板机
1.3检测方法
1.3.1INF-γ的体外释放
使用购自北京万泰生物制药有限公司的试剂盒测试从患者肘静脉采集的全血样品。机体感染结核杆菌以后，血液中的特异性淋巴细胞再次接触结核杆菌特异性抗原时，分泌相应的细胞因子干扰素，微带上预涂的INF-γ抗体可以与血样中的INF-γ结合在一起，用酶标试剂在低温下培养。如果样品中存在INF-γ，则形成“包被抗体-INF-γ酶标记抗体”复合物。在复合物上的HRP催化显色剂生成蓝色产物，反应结束后加入终止液变成黄色。如果病人没有释放干扰素，也就是说，当样品中没有干扰素-γ时，颜色就不会显示出来。
1.3.2INF-γ的定量检测
配液：用蒸馏水将浓缩的洗涤剂稀释20倍
校准品的配制：根据标注，加入新鲜的蒸馏水。等产物完全溶解2~3分钟后，轻轻混合，得到400pg/ml产物。稀释校准产物，最终得到的校准品浓度分别为12.5pg/ml、25pg/ml、50pg/ml、100pg/ml、200pg/ml、400pg/ml。
按照说明书进行编号、加样品稀释液、加待测样品、温育、加酶、二次温育、洗涤、显色、测定。
1.3.3结果判定
单位均为pg/ml
图2结果判读表
必须通过酶标仪的读数确定和计算结果。在读取结果时，应擦拭板底部，并且板的每个孔中应该没有气泡，否则会影响读值。
1.4质量控制
检验人员严格遵守实验室的操作规程和规章制度，确保试剂盒在有效期内，并严格按照说明书进行实验。
1.5统计学方法
使用SPSS17.0软件对所得数据进
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