初始污染菌检查课件.pptVIP

生物学检查n初始污染菌检查n空气中细菌总数检测方法n物体表明和生产人员手细菌总数检测方法

微生物学检查无菌检查微生物限度检查其他（初始污染菌）细菌、真菌数量控制菌

初始污染菌检测?指标含义（！）通过测定检品细菌总数可用来判明检品细菌污染的程度，以及生产单位所用的原料、工具设备、工艺流程、生产人员的卫生状况，是对检品进行卫生学评价的综合依据。

初始污染菌检测n目的：保证灭菌的效果，确定灭菌剂量，监控灭菌过程的有效性。n引用标准：?GB15980-1995一次性使用医疗用品卫生标准?中华人民共和国药典2010版附录微生物限度检查法

GB15980-1995n规定了一次性使用医疗用品灭菌、消毒前、后的卫生标准。对一次性使用医疗用品（包括灭菌和消毒的一次性使用医疗用品）生产企业中生产、装配、包装车间（空气中细菌总数检查方法）等生产过程和生产工人手提出卫生要求的质量控制。

检测环境和检验量ü在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向空气区域内进行。洁净区设置可在微生物室操作ü各类产品每批随机抽样10件样品（10个包装）

方法主要步骤采样菌落计数供试液制备培养

初始污染菌检测采样方法?供试液制备1.供试品是敷料、可以破坏性类可用无菌手续称取10g,放入100ml灭菌生理盐水中充分振荡后取样。作为1：10的供试液。2.2.供试品是液体取10ml加至100ml灭菌生理盐水中充分振荡后取样。作为1：10的供试液。3.3.对供试品不能采用破坏性取样可用浸有无菌生理盐水拭子涂抹采样，被采表面积为100cm.加入灭菌生理盐水100ml。作为供试液。24.4.可用破坏性方法取样供试品：（参照中华人民共和国药典2010年规定进行)5.对有内腔的医疗用器:用定量洗脱液，无菌操作冲洗内腔，反复冲洗，充分振落后取样。6.对一次性输液（血）器的零配件及其他医疗器械:直接用定量洗脱液（1ml/10cm2）冲洗，将洗脱液置于无菌容器中，充分振荡后取样。

初始污染菌检测梯度稀释1ml1ml1:1001:10009mlNacl1ml1:10供试液9mlNacl1ml1ml

检验方法将每样取5份平行样（取一份样品，根据限值制备好供试液后，取5份1:10，取5份1:100，取5份1:1000，……）

初始污染菌检测结果计算公式：平均菌落数×稀释倍数菌数菌数/每件次（或g）=———————————————————件次或重量（g）注意事项：u供试品的取样必须在万级环境中100级净化条件下，无菌操作，防止污染。u应严格遵守无菌操作，同时消除抑菌成份的干扰。

产品初始污染菌数限值：n灭菌产品管道类内腔≤10cfu/件次，外部≤100cfu/件次，非管道类≤100cfu/件次，敷料类≤100cfu/g；消毒产品≤1000cfu/件次或重量（g）

初始污染菌检测用灭菌剪刀将纱布剪成小块，称取10g，移入100ml灭菌生理盐水中，不时振摇。作为1：10供试液。供试液制备?推荐的制备方法样品制备供试液制备供试液10倍递减稀释。尽量避免丝线等杂物的混入。纱布模拟（1）每个稀释级各吸取1ml至每个灭梯度稀释菌平皿，每个稀释级注5个平皿。（2）经灭菌完毕的营养琼脂培养基冷却至45-50℃时，倾注上述各个平皿15ml，另倾注一个注入1ml稀释液（灭菌生理盐水）灭菌空平皿作阴性对照。按一个方向快速转动平皿，使供试液与培养基充分混匀。加样琼脂凝固后，倒置，37℃培养48h培养

细菌计数?基本概念细菌数测定是微生物的定量检查，对非规定灭菌产品中污染的活菌数量进行测定，通常以每克或每毫升供试品作为计量单位。?限制条件平板菌落计数法的特点是先使细胞分散、定位，增生可见菌落后计数。它是一种有条件的计数法，其限制条件大致如下：⑴以菌落数为基础。CFU(colonyformingunits):一个菌落就是一个细菌形成单位，它可以由一个也可以由多个菌细胞形成。⑵受特定培养基和培养条件限制。⑶有繁殖能力的菌细胞才能认定“活菌”。

细菌计数n先用肉眼观察，点数菌落数，然后再用放大5-10倍的放大镜检查，以投射光衬以暗色背景，以防遗漏（可辅助菌落计数器）记下各平皿的菌落数后，求出同一稀释度各平皿生长的平均菌落数（每个稀释度的5个平板值，相加后除以5）。n若平皿中有连成片状的菌落或花点样菌落蔓延生长时，该平皿不宜计数，若片状菌落不到平皿中的一半，而其余一半中菌落数分布又很均匀，则可将此半个平皿菌落计数后乘2，以代表全皿菌落数。

菌落特征⑴形态特征：常为白色、灰白色或灰色，亦有淡褐色、淡黄色（如果培养基中加入0.1%TTC(氯化三苯基四氮唑试剂)，菌落为红色）⑵边缘整齐或不整齐，表面有光滑、粗糙，皱褶、突起或扁平。⑶大小差