仪分实验荧光法测定维生素B2药物中核黄素含量.pptVIP

整理课件整理课件整理课件整理课件整理课件整理课件整理课件整理课件整理课件整理课件整理课件整理课件整理课件Π电子共轭体系（1）灵敏度高比紫外-可见分光光度法高2～4个数量级；为什么？检测下限：0.1～0.1?g/cm-3相对灵敏度：0.05mol/L奎宁硫酸氢盐的硫酸溶液。（2）选择性强既可依据特征发射光谱，又可根据特征吸收光谱；（3）试样量少缺点：应用范围小。*07/16/96*##A.光源：为高压汞蒸气灯或氙弧灯，后者能发射出强度较大的连续光谱，且在300nm～400nm范围内强度几乎相等，故较常用。B．激发单色器：置于光源和样品室之间的为激发单色器或第一单色器，筛选出特定的波长激发光。C．发射单色器：置于样品室和检测器之间的为发射单色器或第二单色器，常采用光栅为单色器。筛选出特定的波长发射光。D．样品室：通常由石英池(液体样品用)或固体样品架(粉末或片状样品)组成。测量液体时，光源与检测器成直角安排；测量固体时，光源与检测器成锐角安排。E．检测器：一般用光电管或光电倍增管作检测器。可将光信号放大并转为电信号。*07/16/96*##*07/16/96*##整理课件*实验报告格式1、实验目的（简单）2、实验原理（详细）3、试剂仪器（简单）4、实验步骤（简单）5、数据处理（详细，表格，图）6、结果讨论（重点）①、回答思考题的问题②、讨论引入误差的原因③、实验操作中的注意事项及减小误差的方法整理课件*荧光法测定维生素B2药物中核黄素含量实验二整理课件*维生素B2维生素B2易溶于水而不溶于乙醚等有机溶剂,在中性或酸性溶液中稳定,光照易分解,对热稳定。稀释后有强烈荧光,维生素B2溶液在430～440nm蓝光的照射下,发出绿色荧光,其峰值波长为525nm。整理课件*一、实验原理

（1）定量依据:维生素B2在水中是强的荧光物质，并且在低浓度时，荧光强度与维生素B2浓度呈正比:If=kc（2）定量方法（标准曲线法）:测定一系列已如浓度的维生素B2的荧光强度，然后以荧光强度对维生素B2浓度作标准曲线，再测定未知浓度维生素B2的荧光强度，把它代入标准曲线方程求出其浓度。整理课件*If=kc荧光强度vs.浓度标准曲线荧光强度核黄素浓度样本整理课件*二、实验仪器测量荧光的仪器主要由四个部分组成:激发光源、样品池、双单色器系统、检测器。特殊点:有两个单色器，光源与检测器通常成直角。整理课件*三、实验步骤及注意事项吸量管的使用，溶液转移，定容同样条件下测定读取荧光数据荧光仪的操作，发射光谱和激发光谱绘制If对浓度C拟合标准曲线4.数据处理2.标准溶液荧光测定3.未知样品荧光测定1.配制标准溶液整理课件*移液管的使用常见移液管:标有温度和容量(注意是否标有吹)用途:准确移取一定体积的液体操作:洗涤(蒸馏水)、润洗(3次)、移液、洗涤干净注意事项：1、整个操作过程中，保持移液管的垂直；2.读数时视线与凹液面平齐溶液下端1-2cm整理课件*1.打开氙灯，再打开主机，然后打开计算机启动工作站并初始化仪器。2.仪器初始化完毕后，在工作界面上选择测量项目，设置适当的仪器参数:确定激发波长和发射波长。3.样品测定。4.退出主程序，关闭计算机，先关主机，最后关氙灯。基本操作整理课件整理课件整理课件整理课件整理课件整理课件整理课件整理课件整理课件整理课件整理课件整理课件整理课件Π电子共轭体系（1）灵敏度高比紫外-可见分光光度法高2～4个数量级；为什么？检测下限：0.1～0.1?g/cm-3相对灵敏度：0.05mol/L奎宁硫酸氢盐的硫酸溶液。（2）选择性强既可依据特征发射光谱，又可根据特征吸收光谱；（3）试样量少缺点：应用范围小。*07/16/96*##A.光源：为高压汞蒸气灯或氙弧灯，后者能发射出强度较大的连续光谱，且在300nm～400nm范围内强度几乎相等，故较常用。B．激发单色器：置于光源和样品室之间的为激发单色器或第一单色器，筛选出特定的波长激发光。C．发射单色器：置于样品室和检测器之间的为发射单色器或第二单色器，常采用光栅为单色器。筛选出特定的波长发