动物细胞培养 高二下学期生物人教版选择性必修3.pptxVIP

第2章细胞工程

第2节动物细胞工程

一动物细胞培养

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1958年，格登

用非洲爪蟾进

行体细胞核移1959年，试植实验，成功管家兔诞生，培育出性成熟→之后，多种个体，同一时试管动物相期，我国科学继出生

家童第周等开

展了鱼类细胞

核移植工作;

从社会中来

在治疗大面积烧伤时，通常采用的方法是取

烧伤病人的健康皮肤进行自体移植。但对这样的病人来说，自体健康皮肤非常有限，使用他人皮肤来源又不足，而且会产生免疫排斥反应。那么,怎样才能获得大量的自体健康皮肤?能不能用自体皮肤的单个细胞培养出可供移植的皮肤?;

动物细胞工程常用的技术包括动物细胞培养、动物细胞融合和动物细胞核移植等，其中动物细胞培养是动物细胞工程的基础。

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一、动物细胞培养的条件

动物细胞培养是指从动物体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后在适宜的培养条件下，让这些细胞生长和增殖的技术。

原理：细胞增殖(有丝分裂)。

1.动物细胞培养的条件

(1)营养：糖类、氨基酸、无机盐、维生素等。

①合成培养基：将细胞所需的营养物质按种类和所需量严格配制的培养基。

②动物血清：含人类未知、细胞生长和增殖所必需的物质。

③培养基的物理性质：培养动物细胞一般使用液体培养基，也称为培养液。

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(2)无菌、无毒的环境

①对培养液和所有培养用具进行灭菌处理。②在无菌环境下进行操作。③培养液需要定期更换，以便清除代谢物，防止细胞代谢物积累对细胞自身造成危害。

(3)温度、pH和渗透压

①适宜的温度：哺乳动物细胞培养的温度多以36.5±0.5℃为宜。

②适宜的pH:多数动物细胞生存的适宜pH为7.2-7.4。③适宜的渗透压：维持细胞正常的形态和功能。

(4)气体环境

通常采用培养皿或松盖培养瓶。并将它们置于含有

95%空气和5%CO?的混合气体的CO?培养箱中进行培养。

0?:细胞代谢所必需的。

CO?:主要作用是维持培养液的pH。

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二、动物细胞培养的过程

取动物组织

制成细胞悬液

转入培养液进行原代培养

放入CO???

培养箱中培养

分瓶

进行传代培养;

1.取动物组织

一般取材于动物胚胎或幼龄动物的组织、器官。因为这些细胞分化程度低，增殖能力强，容易培养。

2.制成细胞悬液

(1)将细胞分散成单个细胞。①机械的方法。②用胰蛋白酶、胶原蛋白酶等处理一段时间。

原因：①从动物体取出的成块组织中，细胞与细胞靠在一起，彼此限制了生长和增殖；②能使细胞与培养液充分接触，更易进行物质交换。

(2)用培养液将细胞制成细胞悬液。

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进行动物细胞培养时常用胰蛋白酶分散细胞，这说明细胞间的物质主要是什么成分?用胃蛋白酶行吗?

用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是蛋白质。胃蛋白酶作用的适宜pH约为2,当pH大于6时，胃蛋白酶就会失去活性。多数动物细胞培养的适宜pH为7.2～7.4,胃蛋白酶在此环境中没有活性，所以用胃蛋白酶不行。

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3.进行原代培养

(1)操作过程：将细胞悬液放入培养皿或培养瓶内，置于适宜环境中培养。原代培养：通常将分瓶之前的细胞培养，即动物组织经处理后的初次培养称为原代培养。

(2)体外培养的动物细胞类型

①悬浮生长类：能够悬浮在培养液中生长增殖。

会因细胞密度过大、有害代谢物积累和培养液中营养物质缺乏等因素而分裂受阻。

②贴壁生长类：需要贴附于某些基质表面才能生长增殖(细胞贴壁),大多数细胞属于此类。除受密度、有害代谢物、营养物质影响外，还会发生接触抑制现象。

接触抑制：当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞通常会停止分裂增殖。

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4.分瓶、进行传代培养

悬浮培养的细胞会因细胞密度过大、有害代谢物积累和培养液中营养物质等因素而分裂受阻，贴壁细胞在生长增殖时，除受上述因素影响外，还会发生接触抑制现象。这时就需要对细胞进行分瓶培养，让细胞继续增殖。传代培养：将分瓶后的细胞培养称为传代培养。

(1)悬浮生长类：直接用离心法收集。

(2)贴壁生长类：需要重新用胰蛋白酶等处理，使之分散成单个细胞，然后再用离心法收集。

之后，将收集的细胞制成细胞悬液，分瓶培养。

2023/2/3;制成细胞悬液

转入培养液进行原代培养;

思考·讨论·有关动物细胞培养的问题

1.幼龄动物的细胞与老龄动物的细胞比较，分化程度低的细胞

与分化程度高的细胞比较，哪些细胞更易于培养?为什么?

细胞的增殖能力与供体的年龄有关，幼龄动物的细胞增

殖能力强，有丝分裂旺盛，