分解尿素的细菌的分离课件.pptVIP

课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

一、课题背景1、尿素的利用尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接被农作物吸收。土壤中的细菌将尿素分解成氨之后才能被植物利用。2、细菌利用尿素的原因土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶脲酶2NH3+COCO(NH)+HO2222

4、课题目的①从土壤中分离出能够分解尿素的细菌②统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌

一.研究思路㈠.筛选菌株㈡.统计菌落数目㈢.设置对照

㈠.筛选菌株1、实例：DNA多聚酶链式反应是一种在体外将少量DNA大量复制的技术，此项技术要求使用耐高温（93的DNA聚合酶。0C）原因：因为热泉温度70～80C，淘汰了绝大多0数微生物只有Taq细菌被筛选出来。启示：寻找目的菌种时要根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。

2、实验室中微生物的筛选原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。也就是用选择性培养基筛选。

3、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数所需培养基：KHPO24NaHPO1.4g2.1g24MgSO7HO0.2g4`2葡萄糖尿素10.0g1.0g琼脂15.0g①从物理性质看此培养基属于哪类？固体培养基②从用途看此培养基属于哪类？选择培养基③从化学成分看此培养基属于哪类？合成培养基

3、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数所需培养基：KHPO24NaHPO1.4g2.1g24MgSO7HO0.2g4`2葡萄糖尿素10.0g1.0g琼脂15.0g②在此培养基中哪些作为碳源、氮源？碳源：葡萄糖氮源：尿素

3、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数所需培养基：KHPO1.4g2.1g24NaHPO24MgSO7HO0.2g4`2葡萄糖尿素10.0g1.0g琼脂15.0g③此培养基是否对微生物具有筛选作用？如果有，是如何进行筛选的？有，此培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑制，所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。

6、怎样证明此培养基具有选择性呢？结果是否接种培养基类型只生长分解尿素细菌以尿素为唯一氮源的培养基实验组是是牛肉膏蛋白胨培养基生长多种微生物对照组判断该培养基有选择性

1.稀释涂布平板法（活菌计数法）⑴原理：在稀释度足够高时，微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成的，即一个菌落代表原先的一个单细胞。其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(ml)，M代表稀释倍数。

分析：两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数。在对应稀释倍数106下两种统计结果。的培养基中，得到以1.第一位同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数为230。2.第二位同学在该浓度下涂布了三个平板，统计的菌落数分别为21、212、256，该同学以这三个平板上菌落数的平均值163作为结果。你认为哪位同学的结果更接近真实值?你认为这两位同学的实验需要改进吗？如果需要，如何改进？答：都不接近，都需要改进。第一位同学需要设置重复实验组。第二位同学统计的三个菌落数相差太大，说明操作有误，需要重新实验。

小结①为使结果接近真实值可将同一稀释度的稀释液涂布到三个或三个以上的平板中培养。②为了保证结果准确，一般选择菌落数在30——300的平板上进行计数，计算出菌落平均数③统计的菌落往往比活菌的实际数目低。

2、显微镜直接计数法：利用血球计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。缺点不能区分死菌与活菌；不适于对运动细菌的计数；需要相对高的细菌浓度；个体小的细菌在显微镜下难以观察；

㈢.设置对照：设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。

实例：在做分解尿素的细菌的筛选与统计菌落数目的实验时，A同学从对应的106倍稀释的培养基中筛选出大约150个菌落，但是其他同学在同样的稀释度下只选择出大约50个菌落。分析其原因。原因：⑴土样不同，⑵培养基污染或操作失误(或者是混入了其他的含氮物质)如何设计实验证明呢？

方案一：由其他同学用与A同学相同土样进行实验结果预测：如果结果与A同学一致，则证明A无误；如果结果不同，则证明A同学存在操作失误或培养基的配制有问题。方案二：将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。小结：通过这个事例可以看出，实验结果要有说服力，对照的设置是必不可少的。

二.实验的具体操作㈠.土壤取样从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土3cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。◆取土样用的小铁铲和盛土样的