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ICS11.220
CCSB41
团体标准
T/CVMA157—2024
猪流行性腹泻病毒微滴式数字RT-PCR
检测方法
AdropletdigitalRT-PCRmethodfordetectionofporcineepidemic
diarrheavirus
2024-5-8发布2024-5-8实施
中国兽医协会发布
T/CVMA157—2024
前言
本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定
起草。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。
本文件由上海市动物疫病预防控制中心提出。
本文件由中国兽医协会归口。
本文件起草单位:上海市动物疫病预防控制中心、湖南冠牧生物科技有限公司、上海市奉贤区生态
养殖服务中心、上海市闵行区动物疫病预防控制中心。
本文件主要起草人:李鑫、杨德全、王建、赵洪进、杨忠苹、鞠厚斌、杨显超、吴文辉、葛菲菲、
沈海潇、郁达义、赵和平、陶田谷晟。
I
T/CVMA157—2024
猪流行性腹泻病毒微滴式数字RT-PCR检测方法
1范围
本文件规定了猪流行性腹泻病毒(Porcineepidemicdiarrheavirus,PEDV)微滴式数字RT-PCR检测
方法的原理、试剂与材料、仪器与设备、操作步骤、结果分析。
本文件适用于猪流行性腹泻病毒核酸的检测。
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文件,
仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其必威体育精装版版本(包括所有的修改单)适用于本
文件。
NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范
3术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义。
4缩略语
下列缩略语适用于本文件。
微滴式数字RT-PCR:微滴式数字反转录聚合酶链反应(Dropletdigitalreversetranscriptpolymerase
chainreaction)
BHQ1:无荧光淬灭基团(Blackholequencher-1)
DTT:二硫苏糖醇(Dithiothreitol)
HEX:六氯-6-甲基荧光素(Hexachlorofluorescein)
PBS:磷酸盐缓冲液(Phosphate-bufferedsalinebuffer)
PEDV:猪流行性腹泻病毒(Porcineepidemicdiarrheavirus)
RNA:核糖核酸(Ribonucleicacid)
5原理
微滴式数字RT-PCR的技术原理是利用微滴化技术将一份反应体系分成数万个纳升级的微滴进行定
量RT-PCR检测,本质上是将传统定量RT-PCR的一次检测变成数万次检测,提高了检测的灵敏度和精准
度。微滴发生器可以将每一份扩增体系分成数万个均匀的纳升级微滴,每个微滴不含或者含有一个至数
个待检核酸靶分子。每个微滴都将作为一个独立的RT-PCR扩增体系,在PCR扩增仪上进行终点RT-PCR
扩增。利用微滴分析仪逐个对每个微滴进行检测,有荧光信号的微滴判读为1,没有荧光信号的微滴判
读为0。然
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