天然药物活性成分的研究.pptVIP

*2．系统预试验供试液制备利用各类成分极性大小的不同，用极性由小到大的溶剂连续抽提，将各类成分分开。常用的溶剂梯度顺序为:石油醚、苯、乙醚、氯仿、醋酸乙酯、正丁醇、丙酮、乙醇、水。每级提取液，可进一步结合化合物的酸碱性不同，采用酸、碱液处理，使其分为酸性、碱性和中性部分。*（四）供试液中化学成分的检识各类化学的检识反应一般在试管、滤纸片或薄层板上进行。检识时应尽量采用对寻查成分专属性强的反应,如蒽醌首选碱液反应；强心苷首选Keller-Kiliani反应；皂苷首选泡沫试验等。另外还可结合仪器分析的方法,如利用甾体皂苷的特征红外光谱,可迅速准确的辨认甾体皂苷。*1．水溶性成分的检识取中药粗粉5g，加50ml蒸馏水，浸泡过夜，或于50～60℃水浴中温浸1小时，滤过，滤液供检识下列各类成分:*（1）糖、多糖和苷类1）Molish反应:取1ml供试液于试管中，加入1～2滴10％α-萘酚乙醇试剂摇匀，倾斜试管45°，沿管壁滴加1ml浓硫酸，分成两层。如在两液层交界面出现紫红色环，表明可能含有糖、多糖或苷类。2）斐林反应:取1ml供试液于试管中，加入新配制的4～5滴斐林试剂，在沸水浴中加热数分钟，如产生砖红色氧化亚铜沉淀，表明含有还原糖。将上述溶液中沉淀滤过除去，滤液加1ml10％盐酸溶液，置沸水浴中加热水解数分钟，放冷后，滴加10％氢氧化钠溶液调pH至中性，重复上述斐林反应，如仍产生砖红色氧化亚铜沉淀，表明可能含有多糖或苷类。*（2）氨基酸、多肽和蛋白质类1）茚三酮反应:取供试液点于滤纸片上，喷雾茚三酮试剂后，吹热风数分钟，如呈紫红色或蓝色，表明可能含氨基酸、多肽或蛋白质。2）双缩脲反应:取1ml供试液于试管中，加1滴10％氢氧化钠试剂，摇匀，再加0.5％硫酸铜溶液，边加边摇匀，如溶液呈现紫色、红紫色或蓝紫色，表明可能含有多肽或蛋白质。3）酸性蒽醌紫反应:取供试液点于滤纸片上，喷洒酸性蒽醌紫试剂，如呈现紫色，表明可能含有蛋白质。*（3）酚类、鞣质类化合物1）三氯化铁反应:取1ml供试液于试管中，加醋酸酸化后，加数滴1％三氯化铁试剂，溶液如呈显绿、蓝绿、蓝黑或紫色，表明可能含有酚性成分或鞣质。2）三氯化铁-铁氰化钾反应:取供试液点于滤纸片上，干燥后，喷洒三氯化铁-铁氰化钾试剂，如立即呈现蓝色，表明可能含有鞣质。喷试剂后应立即观察，若放置一段时间，背景也能逐渐呈蓝色。如欲使纸上的斑点保存下来，在纸片仍湿润时，用稀盐酸洗涤，再用水洗至中性，置室温干燥即可。*3）香草醛-盐酸反应:取供试液点于滤纸片上，干燥后，喷洒香草醛-盐酸试剂，如立即呈不同程度的红色，表明含有间苯二酚和间苯三酚结构的化合物。4）明胶-氯化钠反应:取1ml供试液于试管中，加入1～2滴明胶-氯化钠试剂，如产生白色混浊或沉淀，表明可能含有鞣质。5）咖啡碱反应:取1ml供试液于试管中，加入数滴0.1％咖啡碱溶液，如产生棕色沉淀，表明可能含有鞣质。*（4）有机酸类1）pH试纸反应:取供试液，以广泛pH试纸测试，如呈酸性，表明可能含有有机酸或酚类成分。2）溴酚蓝反应:取供试液点于滤纸片上，喷洒0.1％溴酚蓝试剂的70％乙醇溶液，如在蓝色背景上产生黄色斑点，表明可能含有有机酸。如显色不明显，可再喷雾氨水，然后暴露于盐酸蒸气中，背景逐渐由蓝色变成黄色，而有机酸的斑点仍为蓝色。*（5）皂苷类1）泡沫反应:取2ml供试液于试管中，剧烈振摇2分钟，如产生大量持久性泡沫，再把溶液加热至沸或加入乙醇，再振摇，如仍能产生多量持久性泡沫，表明可能含有皂苷。2）溶血反应:取供试液点于滤纸片上，干燥后，加1滴2％红细胞试液，数分钟后，如在红色背景中出现白色或淡黄色斑点，表明可能含有皂苷。本实验也可在试管中进行。*2.醇溶性成分的检识取10g中药粗粉,加100ml乙醇,沸水浴中回流提取1小时,滤过。滤液回收乙醇至无醇味,取1/2量浓缩液,加10ml乙醇溶解,供甲项检识。剩余的浓缩液加10ml5％盐酸,充分搅拌,滤过,滤液部分供乙项检识。酸水不溶部分,加10ml醋酸乙酯溶解,醋酸乙酯液用5％氢氧化钠溶液振摇洗涤2次（每次2～3ml）,弃去碱水层。醋酸乙酯层再用蒸馏水洗1～2次,至水洗液呈中性,弃去水洗液,置于水浴上蒸发除去醋酸乙酯,残留物用15ml乙醇溶解,供丙项检识。*甲项检识（1）鞣质类:同水溶性成分检识（2）有机酸类:同水溶性成分检识（3）黄酮类1）盐酸-镁粉反应:取1ml供试液于试管中，加镁粉适量，摇匀，加2～5滴浓盐酸，即产生剧烈反应，如溶液呈红色或紫