LRP1基因下调对食管癌细胞增殖和凋亡的影响.docx

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LRP1基因下调对食管癌细胞增殖和凋亡的影响

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摘要：目的探究LＲP1基因对食管癌细胞增殖和凋亡的影响。方法通过已构建的amiＲNA载体靶向沉默LＲP1基因，用脂质体2000转染人食管癌细胞系EC－109，实验分为3组(转染空载体CtrlLＲP1组、LＲP1amiＲNA－3组、转染LＲP1amiＲNA－3干扰载体组)。应用Ｒeal－TimePCＲ和免疫组化实验分别检测LＲP1mＲNA和蛋白的相对表达量，应用流式细胞技术检测人食管癌EC－109细胞的凋亡率。结果人食管癌EC－109细胞转染LＲP1amiＲNA－3干扰载体后，mＲNA和蛋白水平均被有效抑制，LＲP1mＲNA和蛋白表达水平均下降;LＲP1amiＲNA－3组细胞增殖水平低于转染空载体CtrlLＲP1组(P＜0.05)。转染LＲP1amiＲNA－3干扰载体对食管癌细胞产生了凋亡效应，且48h左右凋亡作用达高峰。结论靶向抑制EC－109人食管癌细胞中LＲP1基因的表达可显著抑制细胞的增殖，促进细胞的凋亡，进而影响细胞的生物学行为。

关键词：LRP1基因下调；食管癌细胞增殖和凋亡；影响

引言

食管癌作为一种消化系统恶性肿瘤，严重威胁人们身体健康、影响生活质量。据流行病学调查显示，我国是全球食管癌的高发地带，每年因食管癌死亡人数达巧万余人，位居世界食管癌死亡人数的第一位。食管癌的发生与饮食习惯、致癌物质、疾病、遗传、环境等因素都密切相关。目前，治疗食管癌的临床方法主要有手术疗法、放射疗法、化疗药物疗法、包括内镜疗法在内的非手术疗法等。但食管癌早期诊断困难，且恶性程度高，一经诊断，己至晚期，所以目前食管癌的治疗效果和预后仍然很差，5年生存率仍低于30%。随着分子生物学在肿瘤病因学研究方面的发展，人们对食管癌的发病原因逐步有了新的认识。目前普遍认为食管癌的发生涉及多种因素，多种基因，并且在多阶段发挥作用，利用在分子生物手段对其早期诊断、治疗及预防具有重要意义。研究发现STAT3在食管鳞癌细胞中高表达，本实验以其为靶点，探讨下调STAT3基因表达诱导食管鳞癌细胞TE1凋亡的分子机制。

1LＲP1在食管癌中的突变

目前研究提示，LＲP1基因在DNA水平的突变并不常见。运用聚合酶链反应-单链构象多态性和直接DNA测序的方法对33例食管鳞状细胞癌标本和20例癌旁组织进行LＲP1的突变分析的研究结果提示，仅1例食管癌患者出现异常的SSCP条带;进一步的测序分析提示在第7内含子的802～829位点发生T-C碱基置换;同时对6例食管癌标本和3例正常组织进行直接测序分析，发现在LＲP1第5外显子的热点突变位点并未突变。但是也有研究提示，食管癌细胞株中存在LＲP1基因突变，而且通过导入野生型LＲP1基因可降低食管癌细胞株EC9706的增殖。因此LＲP1基因的突变在食管癌的发生和发展中作用有待进一步研究。

2LＲP1的表观遗传学改变

在一些恶性肿瘤中，LＲP1表达可由启动子甲基化或者转录后修饰而受到抑制。首先研究LＲP1启动子甲基化研究与食管癌的相关性，检测95例中国哈萨克族食管癌患者与65例健康人发现，食管癌患者LＲP1启动子甲基化中位水平高于健康人(10%vs6%，P=0．001)，而且LＲP1启动子甲基化水平与患者的组织病理分级和淋巴结转移水平相关。发现仅18．9%的食管鳞癌患者出现LＲP1启动子甲基化，且与临床病理因素及预后无明显相关(P＞0．05)，其中55．4%的患者LＲP1的mＲNA表达水平降低。尽管LＲP1基因甲基化是LＲP1的表达降低的可能机制，而LＲP1去甲基化能增加食管癌细胞株EC9706中LＲP1的mＲNA或蛋白水平，但是在食管癌中LＲP1启动子高甲基化仍是一个罕见的事件。miＲNAs与食管癌LＲP1的表达变化相关。miＲ-21在食管癌细胞株和组织中均较正常组织表达升高。进一步通过转染miＲ-21抑制体降低miＲ-21在食管癌细胞中的表达，虽然LＲP1mＲNA水平并未变化，但是LＲP1蛋白表达增高并抑制肿瘤细胞增殖，认为miＲ-21通过转录后修饰LＲP1影响食管癌细胞的发生与发展。研究发现，miＲ-130b在食管癌细胞中可通过抑制LＲP1的表达和Akt磷酸化发挥成瘤作用。检测20例食管癌组织发现，miＲ-130b高于邻近癌旁组织，miＲ-130b表达升高导致LＲP1蛋白表达水平下调，而miＲ-130b下调对LＲP1mＲNA无明显影响，同时发现，miＲ-130b间接调节Akt的磷酸化水平，而总Akt蛋白保持不变。过表达miＲ-130b可促进食管癌细胞的增殖以及增加迁移与侵袭能力。miＲ-130b表达受到抑制时，食管癌细胞的增殖和侵袭能力减弱。因此，miＲ-130b可能成为食管癌细胞潜在的治