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向日葵抗黑斑病水平室内鉴定技术规程
1范围
本文件规定了室内向日葵黑斑病抗性鉴定方法和抗病性评价标准。
2规范性引用文件
本文件没有规范性引用文件。
3术语和定义
3.1
向日葵黑斑病Sunflowerblackspot
由向日葵链格孢（Alternariahelianthi）引起向日葵真菌病害。
4向日葵黑黑斑病菌的培养
4.1接种菌株的选择
根据所鉴定品种推广应用区域选择能代表该区域病原菌致病力水平的优势菌系。
4.2培养基的配制
PDA培养基：马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂粉13g、用蒸馏水定容至1000mL。
4.3病原菌的培养
病原菌培养参照DB37/T2212-2012，将向日葵黑斑病菌在PDA平板活化5d～7d后，从菌落边缘挑取菌块接入麦麸培养基（麦麸，加入适量的水，装入小罐头瓶，高压湿热灭菌30min，冷却到室温备用），用于快速扩繁大量的分生孢子。25±2℃培养，菌丝长满罐头瓶后用清水冲洗麦麸培养基，4层纱布过滤获得分生孢子液。血球计数板计数，将分生孢子液的浓度调至1×105个/mL后备用。
5向日葵黑斑病抗性鉴定
5.1对照品种
以黑斑病中等抗性的向日葵品种LD5009作为对照品种。
5.2向日葵的种植
2
将向日葵种子播种在装有无菌土的营养钵中，每个品种播种5钵，每钵播种5粒，25±2℃,16h光照/8h黑暗条件下培养，待向日葵有4片真叶时开始进行喷雾接种。
5.3向日葵抗黑斑病水平鉴定
接种方法参照DB37/T2212-2012，将黑斑病菌体配成孢子浓度为1×105孢子/mL的悬浮液。采用喷雾法接种10mL孢子液于向日葵叶片上，25±2℃条件下，黑暗保湿24h，后置于25±2℃,16h光照/8h黑暗条件下培养，8d后进行观察。每个处理15株幼苗，3次重复。
5.4病害调查及病情指数计算
根据向日葵的发病程度，分为0、1、3、5、7、9级共6个级别，其分级标准如下：0级，——无病症
1级，——褐色、圆形小的散状斑点占总叶面积的1%
3级，——圆形变褐斑占总叶面积的1%-10%，下层叶片被侵染
5级，——圆形变褐斑占总叶面积的11%-25%，植物一半的叶片被侵染
7级，——圆形变褐斑连接聚集，占总叶面积的26%-50%，植物2/3叶片被侵染9级，——暗褐色斑点聚集，侵染超过总叶面积50%，几乎所有叶片被侵染
病情指数计算：
根据各向日葵品种接种后的发病级别，按照下面的公式计算病情指数。
DI=[Σ(各级病叶数×相应病级)／调查总叶数×最高病级]×100
5.5抗性级别划分
依据各品种接种后的病情指数，按照下表对不同的向日葵品种抗性级别进行划分。向日葵黑斑病抗性水平划分标准
抗病级别
抗病型
病情指数
0
免疫（I）
X=0
1
高抗（HR）
0＜X≤11.11
3
抗病（R）
11.12＜X≤33.33
5
中抗（MR）
33.34＜X≤55.55
7
感病（S）
55.56＜X≤77.77
9
高感（HS）
X≤77.78
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