RT-PCR数据分析报告.pdf

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用2-△△Ct法分析real-timePCR数据

联合应用LightCyclerDataAnalysis软件和MSExcel

Bynetmee，netmee163.

引用请注明作者。

1、打开存取的数据文件，点击

2、依次点击，，这是适合SYBRgreen为染料的选项。点击step1：Baseline下的“changegraph

settings”小图标。取消弹出的CustomizeGraph选项卡中的Logarithmis选项，点击“OK”

按钮，退出选项卡。

3、点击下的“changegraphsettings”小图标，取消弹出的CustomizeGraph选项卡中的

Logarithmis选项，点击“OK”按钮，退出选项卡。

4、在选项卡中拖动红色标记线，选取个条曲线都为直线上升部位。

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5、可以在选项卡中观察是否需选取的是曲线直线上升部分。观察绿线部分与S型曲线交叉

的部分是否为直线。

6、如果确为直线，则左侧的“CrossingPoint”值为所需要的Ct值。

7、依次选取下图菜单：将数据导出为文本文件。

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8、打开所保存的文本文件，如图选取

9、将数据粘贴入新建的excel文件，“CrossingPoint”列即是Ct值，删除“Standard”

和“CalculatedConcentration”列。

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10、将目的基因，本例中为“iNOS”的Ct值按标本对应剪切入beta-actin值右侧一列。分

别标记两列数据为“beta-actin”和“iNOS”。

11、设置所有Ct值的单元格格式

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12、数字选项卡，分类选择为数值，点击确定。

13、将E列（目的基因Ct值右侧一列）输入公式“=D4-C4”，求出目的基因与同管beta-actin

Ct值之差，即△Ct。

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14、向下拉复制公式，将