重组DNA分子转化及转化子筛选鉴定(基因工程课件).pptxVIP

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2024-09-22 发布于北京
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重组DNA分子转化及转化子筛选鉴定(基因工程课件).pptx

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转化;;感受态细胞（competentcell）:用理化方法人工诱导细胞，使之处于易于吸收和容纳外源DNA分子的状态。;Ca2+诱导的完整细菌细胞的转化

细菌原生质体的转化

λ噬菌体DNA的转染

电穿孔转化

;Ca2+诱导的完整细菌细胞的转化;大肠杆菌感受态细胞制备方法;CaCl2诱导转化

原理

;大肠杆菌感受态细胞的质粒转化;细菌原生质体的转化;细菌原生质体的制备：赤霉菌原生质体;取0.2-1ml的原生质体悬浮液（108-109原生质体）。

加入10-20微升DNA重组连接液，混匀。

电击。;λ噬菌体DNA的转染;电穿孔转化法;物理转化法---磷酸钙共沉淀法

;物理转化法;物理转化法---脂质体介导法;在显微镜下，将DNA溶液注入受精卵中变大的雄性原核。;物理转化法;病毒转染法;转化率;影响转化率的因素;转化率的影响因素;转化率的影响因素;转化子筛选和鉴定;;由于重组率和转化率不可能达到100%，因此必须借助各种筛选和鉴定方法区分转化子与非转化子、重组子与非重组子、目的重组子与非目的重组子.;转化子的筛选和鉴定方法;载体遗传标记检测;载体遗传标记检测;载体遗传标记检测;载体遗传标记检测;载体遗传标记检测;1限制性酶切图谱法;限制性酶切图谱法;限制性酶切图谱法;克隆DNA序列检测;克隆DNA序列检测;菌落原位杂交法;菌落原位杂交法;克隆DNA序列检测;Sanger双脱氧末端终止测序法;Maxam-Gilbert化学修饰法;杂交测序法;外源基因产物检测;外源基因产物检测