《动物组织中氯丙嗪的残留测定-酶联免疫吸附法》.doc

Q/HMSHMS02—2002

Q/HMSHMS02—2002

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安徽省市场监督管理局发布2024-XX-XX实施2024-XX-XX发布

安徽省市场监督管理局发布

2024-XX-XX实施

2024-XX-XX发布

动物组织中氯丙嗪的残留测定酶联免疫吸附法

DeterminationofChlorpromazineinAnimaltissueEnzymeLinkedimmunosorbentassay

(征求意见稿)

DB34/Txxx-2024

DB34

安徽省地方标准

ICS

备案号：

DB34/TXXX—2024

DB34/TXXX—2024

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前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件代替DB34/T1373-2011《动物组织中氯丙嗪的残留测定—酶联免疫吸附法》，除编辑性修改外主要技术变化如下：

——增加方法检出限、定量限；

——修改了范围（见第1章）；

——修改了样品处理（见第7.1章）；

——增加了灵敏度（见第9章）；

本标准由安徽省兽药饲料监察所提出。

本标准由安徽省农业农村厅归口。

本标准起草单位：安徽省兽药饲料监察所，安徽中青检验检测有限公司、安徽赛如分析检测科技有限公司、安徽科博产品检测研究院有限公司等。

本标准起草人：刘发全等

本标准2011年9月发布，本次为第一次修订。

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动物组织中氯丙嗪的残留测定-酶联免疫吸附法

范围

本文件规定了动物肌肉、肝脏、肾脏和禽蛋中氯丙嗪残留量的酶联免疫吸附测定方法。

本文件适用于动物肌肉、肝脏、肾脏和禽蛋中氯丙嗪残留量的快速筛选测定。

规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

试样制备

采集的动物组织应保存于-18℃的冰柜中，用前恢复至室温，备用。

原理

本方法是酶联免疫法中的竞争性测定法，其主要原理是：样品中游离的氯丙嗪与酶标板上固定的氯丙嗪抗原竞争特异性抗体再通过酶标Ⅱ抗的反应，洗掉游离的酶标物，再通过酶的专一性显色剂显色，根据显色的深浅来判断样品中氯丙嗪的含量，根据竞争性原理，样品中游离的氯丙嗪少，则酶标Ⅱ抗结合多，显色就深，相反，则显色浅。结果可以通过在450nm处测定吸收值计算，颜色变化的程度反映样品中氯丙嗪的含量，在一定浓度范围内吸光度的高低与样品中氯丙嗪的含量成反比。

试剂和材料

除非另有说明，本法所用试剂均为分析纯，水符合GB/T6682二级水的规定。

竞争酶标免疫法氯丙嗪试剂盒，2℃～8℃冰箱中保存。

微孔板：包被有氯丙嗪抗原。

氯丙嗪标准溶液：0ng/mL、0.1ng/mL、0.3ng/mL、0.6ng/mL、1.25ng/mL、5.00ng/mL。

酶标物冻干粉：1瓶。

酶标物稀释液：13mL，1瓶。

酶标物溶液：临用前取酶标物冻干粉，准确加入酶标物稀释液12mL，摇匀。

显色剂：13mL，1瓶。

终止液：13mL，1瓶。

样品稀释液：用水10倍稀释厂商提供的浓缩样本稀释液。

清洗液：用水10倍稀释厂商提供的浓缩洗涤液。

氢氧化钠。

甲醇。

氢氧化钠甲醇溶液：称取0.1g氢氧化钠,用甲醇溶解定容至100mL。

仪器和设备

酶标仪（配备450nm滤光片）。

振荡器。

离心机，不低于6000r/min。

分析天平：感量0.00001g，感量0.001g，感量0.01g。

组织匀浆机，不低于10000r/min。

氮吹仪。

微量加样器及配套吸头：单道20μL，50μL，100μL，1000μL，多道50μL～300μL。

测定步骤

样品处理

称取2.0+0.05g均质后的组织样本于50ml离心管中，分别加入2ml2.5%三氯乙酸，6m乙腈，涡动5min，4000g以上，离心5min，取2ml上层液于50ml离心管中加入2ml的3M氢氧化钠溶液，再加入4.5ml的正已烷，涡动5min，4000g以上，离心5min，取上层有机相3ml于干净离心管管中，50-60℃水浴氮气吹干，加入0.5ml复溶工作液，用涡旋仪涡动1min，溶解干燥的残留物，取50μL进行检测。

测试程序

测定在室温20℃～25℃条件下操作，测定之前将试剂盒以及所有试剂在室温（20℃～25℃）下放置1h～2h。

将足够标准和样品所用数量的微孔条插入微孔架，