免疫原和抗血清的制备PPT课件.pptx

第1次作业;第八章免疫原和抗血清的制备;概述;第一节免疫原的制备;一、颗粒性抗原的制备;;二、可溶性抗原的制备和纯化;1．组织细胞抗原的制备：

清洗剪碎、粉碎离心，取上清

捣碎方法：（1）高速组织捣碎机

（2）研磨法

;2．组织细胞或培养细胞可溶性抗原的制备：

细胞破碎膜蛋白Ag、细胞质Ag、核与核膜Ag

破碎方法：

（1）反复冻融法；

（2）超声破碎法；

（3）自溶法；

（4）溶菌酶处理法；

（5）表面活性剂处理法（提DNA常用）

;（1）超速离心法；

（2）离子交换层析法；

（3）凝胶过滤法；

（4）亲和层析法;11;亲和层析;常用的有免疫电泳法、免疫双扩散法、聚丙烯酰胺凝胶电泳法、结晶法等。常几种方法联合应用。;三、免疫佐剂;一、佐剂的种类：

微生物极其产物：如卡介苗(BCG)、-CSF)。

无机化合物：如氢氧化铝、明矾。

最常用的佐剂——弗氏佐剂

不完全弗氏佐剂：石腊油、羊毛脂

完全弗氏佐剂：石腊油、羊毛脂、结核杆菌;①增强免疫原性。

②增加抗体的滴度。

③引起或增强迟发型超敏反应。;第二节抗血清（PcAb）的制备;一、抗血清的制备程序

（一）、免疫动物的选择;（二）、免疫方法和途径：;1．颈动脉放血法：这是最常用的方法

2．心脏采血法：此法多用于豚鼠、大鼠、鸡等小动物。

3．静脉多次采血法：家兔可用耳中央静脉，山羊可用颈静脉。;（四）、抗血清的鉴定和保存;（1）.4℃保存，可以存放3个月到半年，效价高时，一年之内不会影响使用。

（2）.－20～－40℃，一般保存5年效价不会有明显下降。

（3）.冰冻干燥，封装后可以长期保存，;二、抗血清的制备方案举例;三、抗血清的纯化与鉴定;三、抗血清的纯化与鉴定;第三节单克隆抗体的制备;二、制备流程—细胞杂交瘤技术;三、应用;名词解释：免疫原、免疫佐剂。

问答题：

1.简述免疫原的制备方法。

2.动物选择的基本原则有哪些？

3.免疫方案设计需要考虑哪些因素？

4.抗血清应从哪些方面加以鉴定？如何保存？