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课题1DNA的粗提取与鉴定

一、实验原理

提取生物大分子的基本思路是选用一定的物理或化学方法分离

具有不同物理或化学性质的生物大分子。对于DNA的粗提取而言，

就是要利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的

差异，提取DNA，去除其他成分。

1．DNA的溶解性

DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不

同，利用这一特点，选择适当的盐浓度就能使DNA充分溶解，而使

杂质沉淀，或者相反，以达到分离目的。

此外，DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些蛋白质则溶于

酒精。利用这一原理，可以将DNA与蛋白质进一步的分离。

2．DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性

蛋白酶能水解蛋白质，但是对DNA没有影响。大多数蛋白质不

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能忍受60—80C的高温，而DNA在80C以上才会变性。洗涤剂能

够瓦解细胞膜，但对DNA没有影响。

3．DNA的鉴定

在沸水浴条件下，DNA遇二苯胺会被染成蓝色，因此二苯胺可

以作为鉴定DNA的试剂。

二、实验设计

1．实验材料的选取

凡是含有DNA的生物材料都可以考虑，但是使用DNA含量相

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对较高的生物组织，成功的可能性更大。

2．破碎细胞，获取含DNA的滤液

动物细胞的破碎比较容易，以鸡血细胞为例，在鸡血细胞液中加

入一定量的蒸馏水，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液即可。如果

实验材料是植物细胞，需要先用洗涤剂溶解细胞膜。例如，提取洋葱

的DNA时，在切碎的洋葱中加入一定的洗涤剂和食盐，进行充分的

搅拌和研磨，过滤后收集研磨液。

注意：

①为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？

蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体，水分可以大量进入血

细胞内，使血细胞胀裂，再加上搅拌的机械作用，就加速了鸡血细胞

的破裂(细胞膜和核膜的破裂)，从而释放出DNA。

②加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么？

洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜，有利于DNA的释放；

食盐的主要成分是NaCl，有利于DNA的溶解。

③如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样的影响?

研磨不充分会使细胞核内的DNA释放不完全，提取的DNA量变少，

影响实验结果，导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等。

④此步骤获得的滤液中可能含有哪些细胞成分？

可能含有核蛋白、多糖和RNA等杂质。

3．去除滤液中的杂质

方案一的原理是DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同；方

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案二的原理是蛋白酶分解蛋白质，不分解DNA；方案三的原理是蛋

白质和DNA的变性温度不同。

注意：