1.2基因工程的基本操作程序市公开课课金奖课件公开课一等奖课件省赛课获奖课件.pptx

1.2基因工程的基本操作程序1、目的基因的获取2、基因体现载体的构建3、将目的基因导入受体细胞4、目的基因的检测与鉴定

一、目的基因的获取1、目的基因重要指的是编码蛋白质的基因，也能够是某些含有调控作用的因子2、获取办法（1）从基因文库中获取目的基因。（2）运用PCR技术扩增目的基因（3）人工合成

（1）从基因文库中获取目的基因①基因文库：将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，(分别)导入到受体菌的群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库通过对受体菌的培养而储存基因

基因文库的构建模式图

基因文库基因组文库部分基因文库（cDNA文库）（一种生物的全部基因）（一种生物的部分基因）

②如何从基因文库中得到所需要的基因？根据：目的基因的有关信息如：基因的核苷酸序列基因的功效基因在染色体上的位置基因的转录产物mRNA基因的体现产物蛋白质等特性

①PCR：多聚酶链式反映。是一项在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。②条件：已知目的基因的核苷酸序列。合成引物（2）运用PCR技术扩增目的基因

③原理：DNA双链复制④反映过程：1、加热至90～95℃目的基因DNA解链2、冷却至55～60℃，引物结合到互补DNA链3、加热至70～75℃，热稳定DNA聚合酶从从引物起始互补链的合成

（3）人工合成基因较小，核苷酸序列已知。DNA合成仪

一、目的基因的获取①基因文库中获取②运用PCR技术扩增目的基因③人工合成基因组文库部分基因文库（cDNA文库）原理：条件：反映过程：

二、基因体现载体的构建2、基因体现载体的构成目的基因启动子终止子标记基因等1、体现载体的目的稳定存在并可遗传

启动子：RNA聚合酶识别和结合的部位终止子：位于基因的尾端的一段特殊的DNA片断，能终止mRNA的转录标记基因：鉴别受体细胞中与否含有目的基因，从而将有目的基因的细胞筛选出来

总结：体现载体需由哪几部分构成启动子目的基因终止子标记基因它们的作用是？

三、目的基因导入受体细胞1、导入植物细胞惯用的办法是什么？具体过程是如何的？2、导入动物细胞惯用的办法是什么？基本操作程序是如何的？3、导入大肠杆菌的办法是如何的？钙离子有什么作用？哪些细胞能够作为目的基因的受体？

1、将目的基因导入植物细胞（1）农杆菌转化法①农杆菌特点：易感染双子叶植物和裸子植物，对大多数单子叶植物没有感染能力；其Ti质粒上的T-DNA可转移至受体细胞，并整合到受体细胞的染色体上。

②转化过程：目的基因插入Ti质粒的T-DNA农杆菌导入植物细胞目的基因整合到植物细胞染色体上目的基因的遗传特性得以稳定维持和表达

（2）基因枪法：是单子叶植物中惯用的一种基因转化办法，但是成本较高。（3）花粉管通道法：这是我国科学家独创的一种办法，是一种十简便经济的办法。（转基因抗种棉）

2、将目的基因导入动物细胞办法：显微注射技术操作程序：目的基因体现载体提纯→取卵（受精卵）→（显微注射仪）显微注射→注射了目的基因的受精卵→移植到雌性动物的输卵管或子宫内发育→新性状动物

3、将目的基因导入微生物细胞（1）原核生物特点：繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少等（2）大肠杆菌最惯用的转化办法：用Ca+解决细胞→感受态细胞→体现载体与感受态细胞混合→感受态细胞吸取DNA分子

不能，受体细胞必须体现出特定的性状，才干阐明目的基因完毕了体现。受体细胞摄入DNA分子后就阐明目的基因完毕了体现吗？

分子检测个体鉴定：①检测转基因生物染色体的DNA上与否插入了目的基因②检测目的基因与否转录出了mRNA③检测目的基因与否翻译成蛋白质抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等办法——办法——办法——DNA分子杂交分子杂交抗原-抗体杂交四、目的基因的检测与鉴定

如果显示出杂交带，就表明待测样品含有目的基因或目的基因已经转录。

若不能体现，要对抗虫基因再进行修饰。例：用棉铃饲喂棉铃虫，如虫吃后不出现中毒症状，阐明未摄入目的基因或摄入目的基因未体现。如虫吃后中毒死亡，则阐明摄入了抗虫基因并得到体现。

无表达产物无表达产物有表达产物无表达产物细菌的检测，将每个受体细胞单独培养形成菌落，检测菌落中与否有目的基因的体现产物。裁减无体现产物的菌落，保存有体现产物的进一步培养、研究。