兔瘟组织灭活苗的制作课件.pptVIP

兔病的综合诊断王海荣

流行病学断断病理断

v微生物(Microorganism)形体微小、结构简单，须借助于光学显微镜或电子显微镜进行观察。?病毒(包括噬菌体)；→非细胞型微生物?细菌、放线菌、立克次氏体、支原体、衣原体、螺旋体等；→单细胞原核微生物?真菌：包括酵母菌（单细胞）、霉菌（多细胞）；→真核微生物?单细胞的藻类以及原生动物等。

细菌(bacteria)的细胞形态1、球菌单独存在时为圆球形，几个细菌联在一起时其接触面稍为扁平。按其分裂方向和分裂后排列状态，可以分为：单球菌、双球菌、四联球菌、八叠球菌、链球菌、葡萄球菌。2、杆菌细胞呈杆状或圆柱状，各种杆菌的长度与直径比例差异很大，有的粗短，有的细长，短杆菌近似球状，长杆菌近似丝状。一般来说，同一种杆菌其粗细比较稳定，而长度则经常因培养时间、培养条件不同而有较大变化。有的杆菌很直，有的稍弯，有的两端截平如炭疽芽孢杆菌，有的略尖，有的半圆。

（三）革兰氏染色革兰氏染色法于1884年由丹麦医生Gram创立，是延用至今的经典染色法。经革兰氏染色后可以把全部细菌分为G+和G两大类。-染色机制：与细菌细胞壁的结构和组成有很大关系。G+细菌：肽聚糖层厚，含量多，经乙醇处理后使之发生脱水作用而使孔径缩小，结晶紫与碘的复合物保留在细胞内而不被脱色，复染后不着色，保持结晶紫的颜色；G细菌：肽聚糖层很薄，含量少，脂肪含量高，经乙-醇处理后部分细胞壁脂类可能被溶解并改变其组织状态，细胞壁孔径变大或通透性增加，不能阻止溶剂透入，酒精将结晶紫与碘的复合物洗脱，细菌被脱色，经复染后染成红色。

细胞壁厚度与强度革兰氏阳性菌(G+)厚、致密、坚韧革兰氏阴性菌(G-)薄、疏松肽聚糖数量、含量多层、含量高、占细胞单层、含量低、占细胞干重40—90%干重5—10%脂类含量少、占细胞干重1-4%多、占细胞干重11-22%磷壁酸（垣酸）+--脂多糖、磷脂、脂蛋白+磷壁酸肽聚糖脂蛋白

染色操作步骤—涂片固定滴生理盐水挑取菌苔一环涂片热固定

革兰氏染色法1.涂片、干燥及固定2.初染：在做好的涂面上滴加草酸铵结晶紫染液，染1-2分钟，倾去染液，流水冲洗至无紫色。3.媒染：先用新配的路哥氏碘液冲去残水，而后用其覆盖涂面1分钟，后水洗。4.脱色：除去残水后，滴加95%酒精进行脱色约25秒，后立即用流水冲洗。5.复染：滴加番红染色液，染2分钟，水洗后用吸水纸吸干。6.镜检：观察染色结果图。

细水冲洗细水冲洗结晶紫初染2min碘液媒染1min细水冲洗蕃红复染1~2min95%酒精脱色20s

革兰氏染色成败关键：l酒精脱色，脱色不够将G-转变为G，+脱色过度将G+-；变成Gl涂片要均匀、薄；l菌龄影响染色，菌龄老、陈旧的细菌培养物，往往G+转变成G，一般做革兰氏染色-用18小时左右的细菌培养物，不要超过24小时，以免影响染色性。

油镜操作规程1.先用低倍镜和高倍镜观察涂片，待看到目的物后，将其移到视野中央。2.在涂片上滴一滴香柏油，转动换转器使油镜针对通光孔。3.使油镜与香柏油接触，这时油镜头几乎与载玻片相接触，切记不能使用粗调，以免压碎载玻片。4.用细调旋钮慢慢提升镜头高度，直至物像清晰。切勿拧反方向。5.观察完毕后，使镜筒远离载物台。取下载玻片。用擦镜纸擦去镜头上的香柏油：先用干的擦镜纸擦1～2次，把大部分油去掉，再用二甲苯滴湿的擦镜纸擦2次，最后再用干擦镜纸擦1次。擦拭时要顺镜头的直径方向，不要沿镜头的圆周擦。擦拭要细心，动作要轻。

五、结果：绘模式种、自选种镜检油镜视野图（比例、形状准确，注放大倍数，染色特性）G+(金黄色葡萄球菌)G-（枯草芽孢杆菌）G-（大肠杆菌）

GramStainofEscherichiacoliGramStainofStaphylococcusaureusAGramStainofaMixtureofGram-PositiveandGram-NegativeBacteria.

兔病毒性出血症的诊断及其组织灭活苗的制造王海荣

兔的病毒性出血症（rabbitviralhemorrhagicdiseaze）是兔的一种急性败血性传染病，RHDV抗原性强，组织灭活苗效果极佳，安全可靠，目前广泛使用的是肝组织甲醛灭活苗，联苗兔瘟、巴氏杆菌二联苗也已使用。

组织灭活苗可分加佐剂和不加佐剂两种。含佐剂苗所产生的抗体水平较高于无佐剂苗，但产生免疫力的时间迟于无佐剂苗，而且生产程序较为复杂，成本也高。当发生免瘟时，作为紧急接种，选用无佐剂苗更为理想，因产生免疫力较快，可提早控制疫情，即使平时预防接种，无佐剂苗也极为有效。

一材料（1）种毒强毒株组织毒1:10悬液感染成兔肌注1ml，48～72小时引起发病死亡。（2）制