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A分子标记技术及其在苹果

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论文摘要：简要介绍了DNA分子标记技术，综述了DNA分子标记在苹果品种鉴定、亲缘关系分析、种质资源保存、遗传多样性检测、分子遗传图谱构建、基因标记等方面的应用，并对其在苹果研究中存在问题和应用前景进行了讨论。

论文关键词：分子标记,苹果,应用

1DNA分子标记技术

随着人类对基因从现象到本质的认识，遗传标记逐步从形态标记、细胞学标记和生化标记发展到能直接反应DNA水平上遗传多态性的DNA分子标记。与经典的遗传标记相比较，DNA分子标记具有不受材料来源和环境的限制，遗传稳定、多态性高、标记位点多、共显性、选择中性、重复性好、检测迅速、操作简便等优势，所以DNA分子标记被视为理想的遗传标记技术，而且迅速得到发展。目前，已有20多种分子标记技术被发展和利用。基于DNA多态性的分子标记技术主要可以分为三类：第一类以传统的Southern杂交为基础，RFLP(RestrictionFragmentLengthPolymorphism)为代表；第二类以PCR技术为基础，RAPD(RandomlyAmplifiedPolymorphicDNA)、STS(SequenceTaggedSite)、SCAR(SequenceCharacterizedAmplifiedRegion)和AFLP(AmplifiedFragmentLengthPolymorphism)为代表；第三类以重复序列为基础,SSR(SmipleSequenceRepeat)为代表。

随着分子生物学、遗传学、生物化学等学科理论研究的不断深入和实践应用的不断成功，DNA分子标记技术已被广泛的应用于遗传育种、种质资源鉴定、植物抗病基因定位、植物分类等诸多研究领域。经常应用于果树研究的DNA分子标记有RFLP、RAPD、AFLP、SSR和SCAR等。

2DNA分子标记技术在苹果研究中应用

2.1品种的鉴定

苹果是多年生木本植物，栽培历史悠久,不同地域间的种质交流频繁，导致种质混乱，同名异种现象普遍。传统的形态和同工酶分析方法误差大、效率低，难于对相似的品种进行准确的鉴定。DNA分子标记技术直接从DNA分子水平上对果树品种(系)进行鉴定和分类,准确性更强,效率更高,信息量更大,近几年已得到广泛应用。

Koller等用引物P2(5’ACGAGGGACT3’)成功地区分了11个苹果品种。Tancred等将澳大利亚选育的特早熟品种GB-63-43与其余3个相似品种区分开。祝军等应利用AFLP技术区分了25个苹果品种,用RAPD技术区分了16个苹果品种。周爱琴等用RAPD分析绘制了19个苹果生产上主要砧木的DNA指纹图谱,为苹果砧木的鉴定提供了新的依据。

2.2亲缘关系的确定

苹果中存在许多天然杂种,对一些经实生选种或采用混合花粉杂交选育的品种的亲本无法确定,在品种DNA指纹图谱建立的基础上对其进行聚类分析，可将品种进行分类以鉴定物种起源的亲缘关系。苹果品种津轻是日本1936年以金冠为母本杂交育成,经RAPD结合RFLP分析确认其父本为红玉。乔纳金和陆奥是两个三倍体品种,是金冠分别与红玉、印度杂交而成,RAPD分析表明二者都含有金冠的2n配子。王涛等利用AFLP分析了20个重要苹果砧木间的亲缘关系，聚类分析表明苹果属(MalusMill.)中的两个亚属的砧木被分别聚成两个大组，即花楸苹果亚属(SorbomalusZabel)大组和真苹果亚属(Eu-malusZabel)大组。

2.3种质资源的保存

果树种质资源是为生产提供优良品种的源泉，是果树育种和品种改良的物质基础,因此果树种质资源是人类的宝贵财富。遗传资源的长期保存需要消耗巨大的人力物力，核心种质(corecollection)的概念就是为了尽可能降低消耗而被提出的，利用核心种质理论来长期保存种质资源是提高种质资源管理质量和效率的重要途径，它不但要求对种质的农艺性状进行研究,还要研究它们的遗传变异,以避免重复、减少缺失。Mcferson认为分子标记可以用于核心种质的确定。HokansonS.C.等用SSR结合园艺性状建立了苹果的核心种质。

2.4遗传多样性的检测

遗传多样性一般是指种内的差异水平,它反映着一个物种适应环境的能力及其被改造和利用的潜力。遗传多样性是生命系统的基本特征，也是物种适应自然和发生进化的遗传基础。分子标记产物的多态性反映了被测材料的多样性。分子标记是检测种质资源遗传多样性的有效工具。张开春等用38个随机引物进行RAPD分析,在DNA水平上说明了我国的苹果无融合生殖资源平邑甜茶(Malushupehensis)具有丰富的遗传多样性。

2.5分子遗传图谱的构建

分子标记以其自身的优点成为构建遗传图的主要标记，随着分子标记的发展，遗传图谱己经达到了一定的密集程度，高