全自动生化分析仪的常用检测方法(精)课件.pptVIP

董苹2010-8

内容?一概述?二基本原理终点法?三检测方法固定时间法连续监测法

功能特点?特点：自动化——机械化的仪器设备模仿代替手工操作?优点：提高了工作效率减少了主观误差?灵敏准确快速标准化

分类管道连续流动式?按结构原理分分立式——常用离心式干片式——急诊常用小型?按测定速度分中型大型超大型（模块式）?按自动化程度分半自动全自动

主要构成?加样系统（样品转盘试剂仓取样装置）?比色系统（光源比色杯单色器检测器）?供排水系统?数据处理系统

内容?一概述?二基本原理终点法?三检测方法固定时间法连续监测法

基本原理?临床生化分析仪最常使用的是——分光光度法?分光光度法——是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度，对该物质进行定性和定量分析的方法。

分光光度计组成光源单色器样品池检测器记录装置

光吸收曲线?溶液对不同波长光的吸收程度，通常用光吸收曲线来描述。

讨论?不同浓度的同一种物质，其吸收曲线形状相似λ不变。而对于不同物质，它们的max吸收曲线形状和λ则不同。max?不同浓度的同一种物质，在某一定波长下吸光度A不同，在λmax处吸光度A的差异最大。此特性可作为物质定量分析的依据。

在分光光度法中,以吸__光__度__为纵坐标,以_波_长__为横坐标作图可得光吸收曲线。浓度不同的同种溶液,在该种曲线中其最大吸收波长_______，相应的吸光度大小相同则_______，同一波长下摩尔吸数相同。不同

Lamber-Beer定律：吸收光谱法基本定律描述物质对单色光吸收强弱与液层厚度和待测物浓度的关系Lamber定律：A∝lBeer定律：A∝C入射光强度I0透射光强度I物体截面为S厚度为l

Lambert-Beer（朗伯-比尔）定律?当一束平行单色光通过均匀的非散射样品时，样品对光的吸光度与样品的浓度及厚度成正比?A=kcb?A---吸光度k---吸光系数c---溶液浓度b---液层厚度

吸光度?透光度的负对数表示物质对光的吸收程度A=-lgT=lg1/T=lgI0/ItT---透光度I0--入射光强度/IIt--透射光强度T=It0

吸光系数?定义：吸光物质在单位浓度及单位厚度时测得的吸光度。?K值的大小取决于吸光物质的性质、入射光波长、溶液温度和溶剂性质等，与溶液浓度大小和液层厚度无关。但K值大小因溶液浓度所采用的单位的不同而异。

吸光系数?三种表现形式：摩尔吸光系数ε吸光系数a百分吸光系数E1%1cm

Lambert-Beer（朗伯-比尔）定律?郎伯-比尔定律表明：当液层厚度固定时，溶液的吸光度与溶液的浓度成正比。即：A/C=const?故：只要测出某种溶液的吸光度，将它与已知浓度的标准溶液吸光度进行比较，就可以算出该溶液的浓度。

讨论：1.Lamber-Beer定律的适用条件（前提）:?入射光为单色光?溶液是均匀，无散射溶液2.该定律适用于固体、液体和气体样品3.在同一波长下，各组分吸光度具有加和性如果溶液中同时存在两种或两种以上的吸光性物质,则测得的该溶液的吸光度等于溶液中各吸光性物质吸光度的总和，即：A＝A＋A＋A（a+b+c）abcü应用：多组分测定

偏离Beer定律的因素?依据Beer定律,A与C关系应为经过原点的直线?偏离Beer定律的主要因素表现为以下两个方面：ü（一）光学因素ü（二）化学因素

（一）光学因素1．非单色光的影响：Beer定律应用的重前提—入射光为单色光?照射物质的光经单色器分光后并非真正单色光?其波长宽度由入射狭缝的宽度和棱镜或光栅的分辨率决定?为了保证透过光对检测器的响应，必须保证一定的狭缝宽度?这就使分离出来的光具一定的谱带宽度

讨论入射光的谱带宽度严重影响吸光系数和吸收光谱形状E＝E12E≠EA与C不成线性关系，偏离Beer定律A=EC·L112（E-E)↑A与C偏离线性关系越严重21结论：●选择较纯单色光（Δλ↓，单色性↑）●选λ作为测定波长max

（一）光学因素2.杂散光的影响?杂散光是指从单色器分出的光不在入射光谱带宽度范围内，与所选波长相距较远。?杂散光来源：仪器本身缺陷；光学元件污染造成?杂散光可使吸收光谱变形，吸光度变值。

（一）光学因素3．反射光和散色光的影响：?反射光和散色光均是入射光谱带宽度内的光直接对T产生影响。?散射和反射使T↓，A↑，吸收光谱变形注：一般可用空白对比校正消除4．非平行光的影响：?使光程↑，A↑，吸收光谱变形

（二）化学因素?溶液中的溶质可因c的改变而有离解、缔合、配位以及与溶剂间的作用等原因而发生偏离L-B定律的现象。?例：在水溶液中，Cr(